大豆多肽的分子量分布测定及体外消化实验

　　大豆多肽的分子量分布测定及体外消化实验

　　现代生物代谢试验发现，蛋白质并非必须通过消化道中的多种蛋白酶水解后，*终以氨基酸的形态才能被人体吸收，而是大部分在多肽(特别是二、三肽)形态时就能直接吸收。在用合成肽做的实验中，发现二肽和三肽的吸收速度比同一组成的氨基酸快。短肽的吸收率比氨基酸大，比氨基酸更易、更快被机体吸收利用;短肽的低抗原性使得食后不会引起过敏反应;且短肽的渗透压比氨基酸低，食后也不会引起痢疾等不良反应;短肽还具有良好的感官效应。

　　因此，大豆多肽是一种具有多种保健功能的功能性食品添加剂原料，市场前景十分广阔。但是，肽类产品的功能性取决于其产品分子量分布和产品在体内经消化道后的稳定性，为验证中食都庆(山东)生物技术有限公司生产大豆多肽(商品名称：肽而康)产品质量，我们对该产品进行了分子量分布测定及体外消化实验，目的是为肽而康产品为原料开发功能保健系列产品提供产品稳定性的理论依据。

　　试验样品为中食都庆(山东)生物技术有限公司生产的大豆多肽(商品名称：肽而康)产品(干粉)。试剂为华美生物工程公司提供的消化酶(胃蛋白酶和胰蛋白酶)。缓冲液自制。缓冲液A，0.05mol/LHCl-KCl;缓冲液B，0.05mol/LKH2PO4-NaOH。

　　试验仪器有英国Micromass公司毛细管液相色谱-四*杆-飞行

　　时间串联质谱仪(CapLCQ-TOF2);沃特斯公司的Waters600HPLC，

　　凝胶色谱柱为WatersPak60;大连江申分离科学技术公司的反相色谱

　　柱CenturySILC8300A。

　　分子量分布的测定方法是将大豆多肽溶解于水，用HPLC进行凝胶过滤，收集各主要峰，用质谱法测定各组分的分子量。

　　多肽序列测定的方法是将大豆多肽溶解于水，直接用质谱法测定多肽的氨基酸序列。

　　体外消化包括胃蛋白酶消化和胰蛋白酶消化。称取大豆多肽粉1g，加缓冲液A10ml，留取1ml作为对照;剩余的样品中加入0.09g胃蛋白酶(0.19g胰蛋白酶)，37℃水浴3小时，然后进行高效液相色谱法(HPLC)分析。

　　HPLC分析：凝胶过滤色谱：流动相，水;流速0.5ml/min;上

　　样量10～20μl。反相色谱：流动相A，0.1%TFA，流动相B，乙腈+

　　0.1%TFA;洗脱梯度，0～70%流动相B20分钟，流速0.5ml/min。

　　本研究结果显示，中食都庆(山东)生物技术有限公司生产的大豆多肽分子量均低于1000，且主要集中在245～700之间，即大多由2～6个氨基酸组成;经胃蛋白酶处理后，大豆多肽的凝胶色谱图基本上没有变化，说明该大豆多肽95%以上未被消化;经胰蛋白酶处理后的凝胶过滤色谱图与处理前略有变化，但其变化率不超过5%，约90%的大豆肽未被消化，说明该产品具有良好的稳定性，在体内大部分将以多肽的形式被直接吸收。同时应用该大豆多肽产品开发功能性食品时，大豆多肽本身所具有的各项生理功能将不应发生改变。