GC–FID法测定标准物质中有机杂质含量-百检网

　　1.2 机器工作条件

　　色谱柱：AgilentDB–1型(30m×0.53mm，1.00μm);柱温：起始为200℃，以5℃/min升温至280℃恒温;汽化温度和FID温度均为290℃;进样量：1μL。参考溶液的配制：准确称取十四酸甲酯纯度标准物质13.04mg于50mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容。试样溶液的配制：准确称取自制DBS标准物质约6000.00mg于50mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容。同法平行配制8份试样溶液。

　　1.3 计算公式

　　检测参考溶液，根据式(1)求出参考物质的质量响应值Ss，根据式(2)计算待测杂质的质量响应值Si。检测试样溶液，根据式(3)计算待测杂质的含量。

　　As——参考溶液中十四酸甲酯的色谱峰面积;

　　ρ——十四酸甲酯的纯度，%;

　　ms——参考溶液中十四酸甲酯的称样量，mg;

　　Si——计算出的待测杂质i的质量响应值，mg–1;

　　Ci——待测杂质i的有效碳数;

　　Cs——十四酸甲酯的有效碳数;

　　Ms——十四酸甲酯的摩尔质量，g/mol;

　　Mi——待测杂质i的摩尔质量，g/mol;

　　wi——待测杂质i的含量，%;

　　Ai——试样溶液中待测杂质i的色谱峰面积;

　　m——试样称样量，mg。

　　1.4 检测结果

　　用GC–FID法对DBS中的7种有机杂质定量，共检测8个平行样，按含量从高到低排列，测定数据见表1，DBS试样溶液色谱图见图2。

　　2 定值结果的不确定度评定

　　DBS中7种有机杂质检测结果的不确定度评定过程相同，现以含量*高的杂质十二碳二酸二丁酯为例进行评定，数学模型为式(3)。

　　2.1 不确定度分量及其计算

　　2.1.1 测量重复性引入的标准不确定度u(rep)

　　测量重复性主要包括质量称量、试样定容、色谱进样体积、色谱峰积分面积的重复性，通过8次重复实验，得到十二碳二酸二丁酯测定结果的相对标准偏差为1.8%，此数值可直接作为相对标准不确定度[9]，因此测量重复性引入的相对标准不确定度为urel(rep)=0.018。

　　2.1.2 样品称量引入的标准不确定度u(m)

　　天平称量引入的不确定度主要来源于重复性、称量误差。在2.1.1中评定测量重复性时已包含质量称量的重复性。本实验采用感量为0.02mg的天平，按矩形分布考虑，包含因子k=3，则由天平称量引起的标准不确定度为0.02/k=0.012mg。分别用增量法称量参考物质和试样，各为两次独立的称量，则标准不确定度u(m)=20.0120.017(mg)#2=。称量相对标准不确定度分别为u(m)/6000.00=0.000003和u(m)/13.04=0.0013，两个不确定度分量互不相关，故

　　2.1.3 Si计算值与真实值的偏差引入的标准不确定度u(Si)

　　根据参考物质的Ss按有效碳数理论推算待测物的质量响应值Si，故需评定Si计算值与真实值之间的偏差引入的不确定度。通过查阅资料和实际检测两种方式获取数据进行评定。苯甲酸甲酯、苯二甲酸二甲酯在FID上Si计算值与真实值之间相对偏差的**值分别为6.25%，6.38%[10]。挑选与待测杂质结构、相对分子质量相近的8种有机酯，以十四酸甲酯为参考物质，按有效碳数法计算出8种有机酯的质量响应值[10]，以实测值为真值计算相对偏差的**值，数据见表2。从表2数据可知，Si计算值与真值之间相对偏差的**值为0.12%～5.21%。综合考虑，Si计算值与真实值的偏差引入的相对标准不确定度urel(Si)=10.0%=0.100。

　　2.1.4 用50mL容量瓶定容试样溶液引入的标准确定度u(V1)

　　容量瓶定容引起的不确定度主要来源于重复性和容量误差。定容时实验室温度为(20±2)℃。由于温度影响和读数操作随机效应导致的不确定度已在2.1.1测量重复性中评定。本实验使用容量误差为±0.05mL的50mL容量瓶定容，按矩形分布考虑，包含因子k=3，则容量瓶引入的标准不确定度为0.05/k=0.029mL。参考溶液和试样溶液分别用两只容量瓶定容，故定容引入的标准不确定度

　　，引入的相对标准不确定度

　　。

　　2.1.5 微量注射器进样1μL引入的标准不确定度u(V2)

　　微量注射器进样引入的不确定度主要来源于重复性和容量误差。按照2.1.4评定，u(V2)=0.02/k=0.012μL，urel(V2)=0.012/1=0.012。

　　2.1.6 色谱峰面积积分引入的标准不确定度u(A)

　　色谱峰面积积分引入的不确定度主要来自两个方面：重复性、积分误差。随机效应导致的不确定度已在2.1.1测量重复性中评定。碳十四酸甲酯色谱峰面积约为2×104，十二碳二酸二丁酯色谱峰面积约为1×104，色谱工作站记录峰面积*低为107的色谱峰能被清晰分辨，因此进样色谱峰面积积分引入的相对标准不确定度分别为107/(2×104)=0.0054和107/(1×104)=0.0107，两个不确定度分量互不相关，故urelA0.00540.01070.0122^h=+=。

　　2.1.7 参考物质纯度引入的标准不确定度u(ρ)

　　定值采用的参考物质是碳十四酸甲酯，纯度为(99.5±0.5)%(k=2)，因此u(ρ)=0.5%/k=0.0025，所以引入的相对标准不确定度：urel(ρ)=0.0025/99.5%=0.0025。

　　2.2 合成不确定度

　　以上各不确定度分量互不相关。可以看出不确定度分量中参考物质纯度、称量、定容对合成标准不确定度影响较小，根据JJF1059–1999[11]规定，该不确定度分量可以忽略，所以合成相对标准不确定度：urel(w)urel(rep)urel(Si)urel(V)urel(A)22222=+++=0.103。测得十二碳二酸二丁酯含量w为0.110%，则合成标准不确定度为：u(w)=urel(w)×w=0.012%。

　　2.3 扩展不确定度

　　取包含因子k=2，则扩展不确定度U(w)=ku(w)=0.024%，因此DBS中十二碳二酸二丁酯含量ω的测定结果为0.110%，U=0.024%(k=2)。本法测得DBS中7种有机杂质总量为0.29%，U=0.07%(k=2)。