狂犬病毒检测——病原检测

　　免疫荧光法检测抗原：病人的脑脊髓液或唾液直接涂片、病人的角膜印片或咬伤部位皮肤组织或脑组织印片或冷冻切片，丙酮固定，抗狂犬病毒特异性荧光抗体染色检测狂犬病毒抗原。

　　快速狂犬病酶联免疫吸附法检测抗原：

　　(1)用 pH 9.6 的碳酸盐缓冲液稀释的抗狂犬病毒核衣壳 IgG 包被 96 孔酶标板，4℃过夜;

　　(2)用含 0.3%牛血清白蛋白和 5% 蔗糖的 pH9.6 碳酸盐缓冲液封闭 30 分钟;

　　(3)将采集到的标本研磨，用 pH 7.4 PBS制成 30%的悬液，离心取上清加入酶标板孔内，同时设阴性、阳性对照，200 µ l/孔，37℃孵育 1 小时;

　　(4)洗板四次后加入纯化的酶标记抗狂犬病毒抗体 200μl/孔，37℃ l 小时后洗板，加入酶反应底物，室温作用 30 分钟，2M H2SO4 终止反应，肉眼观察或酶标仪测定结果。