检测及试验方法
色谱条件
色谱柱是十八烷基硅烷键与硅胶填充柱,即Agela Technologies promosil XBPl8 5μm 4.6 mm×250mm。其流动相比例为流动相A：流动相B= 90:10,茶碱与羟丙茶碱的分离度均在1.5以上。流速为1.0 ml/min,进样量是10μl,检测波长达到270 nm,理论板数不低于1500,柱温维持在30℃。
对照品溶液的制备
分别精密的称取茶碱与二羟丙茶碱对照品5~25ml置于容量瓶内,再加入甲醇进行溶解稀释至刻度,摇匀作为对照的储备液。另外在各自称取1~10ml至容量瓶中加入甲醇溶解稀释,作为混合的对照品溶液。
供试品溶液的制备
如果供试品为片剂或丸剂,通常取用1d的服用量,将50ml的细粉放入容量瓶中,加入适量的甲醇溶解稀释,同时选用超声处理15min,并进行振摇使得药品均匀,放冷至室温后过滤获得续滤液作为供试品溶液。或取口服液体10ml,按照2:8的比例添加氯仿和甲醇,超声15min后,将液体放冷,加入混合液进行稀释,摇匀滤过后,将获得的续滤液蒸干,所剩的残渣加入甲醇达到25 ml成为供试品溶液。
方法学考察
1.线性关系考察
将对照品储备液分别吸取0.25 ml、1 ml、4 ml以及10 ml,制成浓度为5μg/ml、20μg/ml、80μg/ml、以及200μg/ml的各种标准溶液,再以10μl的进样量注入LC2010C中。根据峰面积所形成的曲线,得出茶碱与二羟丙茶碱的线性回归方程为：茶碱：Y=32232X+2031.5,R=0.9998；二羟丙茶碱：Y=19918X+19141, R=0.9996。表明茶碱与二羟丙茶碱线性关系良好时,其进样量为5~200μg/ml。
2.检出限试验
将两种对照品储备液溶解稀释若干倍以后,以10μl的进样量注入LC2010C中,重点记录主峰高度为噪音峰高3倍时的色谱图。*后检测出茶碱的检出限为1ng,二羟丙茶碱4ng。
3.精密度试验
选用线性试验下的混合标准液200μg/ml,注入LC2010C中反复进行5次试验。根据色谱图,并计算出茶碱同二羟丙茶碱的峰面积,*后得出两种化学药品的RSD依次为0.198%和0.170%,可以看出两种化学药品成分的精密度都相当高。
4.重复性试验
按照回收率试验的样品,以10μl的进样量注入LC2010C中,前后共进行5次,详细记录好每项的色谱图。得到的茶碱RSD为0.70%,二羟丙茶碱1.03%。从在这样的检测试验方法下,可知茶碱与二羟丙茶碱所呈现的重复性良好。
检测结果
通过上面几种不同的方法学试验分析,可以看出该方法适用于茶碱与二羟丙茶碱的高效液相色谱检测。经过精密的HPLC检测,在37批样品中不存在添加茶碱与二羟丙茶碱两种化学药品的止咳平喘类中成药。
