1.范围
本标准规定了食品中志贺氏菌( Shigella)的检验方法。
本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。
2.设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
a) 恒温培养箱:36℃±1；
b) 冰箱:2℃～5℃；
c) 膜过滤系统；
d) 厌氧培养装置:41.5℃±1℃；
e) 电子天平:感量0.1g；
f) 显微镜:10×~100×；
g) 均质器；
h) 振荡器；
i) 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1m刻度)或微量移液器及吸头；
j) 无菌均质杯或无菌均质袋:容量500mL；
k) 无菌培养皿:直径90mm；
l) pH计或pH比色管或精密pH试纸；
m) 全自动微生物生化鉴定系统。
3.培养基和试剂
3.1 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素:见附录A中A.1。
3.2 麦康凯(MAC)琼脂:见附录A中A.2。
3.3 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐(XLD)琼脂:见附录A中A.3。
3.4 志贺氏菌显色培养基。
3.5 三糖铁(TSI)琼脂:见附录A中A4。
3.6 营养琼脂斜面:见附录A中A.5。
3.7 半固体琼脂:见附录A中A6。
3.8 葡萄糖铵培养基:见附录A中A.7
3.9 尿素琼脂:见附录A中A8。
3.10 β-半乳糖苷酶培养基:见附录A中A.9
3.11 氨基酸脱羧酶试验培养基:见附录A中A.10。
3.12 糖发酵管:见附录A中A.1l。
3.13 西蒙氏柠檬酸盐培养基:见附录A中A.12。
3.14 粘液酸盐培养基:见附录A中A.13。
3.15 蛋白胨水、靛基质试剂:见附录A中A.14。
3.16 志贺氏菌属诊断血清。
3.17 生化鉴定试剂盒。
4.检验程序
志贺氏菌检验程序见图1。
5.操作步骤
5.1 增菌
以无菌操作取检样25g(nL),加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯,用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000rmin均质;或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中,用拍击式均质器连续均质lmin～2min,液体样品振荡混匀即可。于41.5℃±1℃,厌氧培养16h～20h。
5.2 分离
取增菌后的志贺氏増菌液分別划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上,于36℃±1℃培养20h～24h,观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若岀现的菌落不典型或菌落较小不易观察,则继续培养至48h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。
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