在活性污泥中加入一定量的合成污水，接触30min或30h,测定好氧微生物呼吸速率。在相同的条件下，测定试验系统中加入不同浓度受试物后同一活性污泥的呼吸速率。用占两个对照组呼吸速率均值的百分数不是特定浓度受试物的抑制效应。由不同浓度的实验结果计算出EC50。
三、报告
报告必须包括下列内容：
3.1受试物：化学特性鉴定数据
3.2受试条件：
接种物：状态和取样地点，浓度和预处理方式；
试验周期与温度；
受试物与参比物的
非生物耗氧量（若存在）
3.3 结果：
测试数据；
呼吸抑制曲线和
EC50（有条件，提供95%置信限）、EC20、EC80；
所有观测结果以及任何偏离本方法并有可能影响实验结果的情况；
3.4 结果讨论