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酿酒酵母感觉态细胞的制备
(1) 从YPD平板上挑取一个奇怪的酿酒酵母EBY100单克隆至10 mlYPD液体作育基,30℃,250 rpm作育留宿;
(2) 测定留宿作育物的OD600值为3.0~5.0之间;
(3) 将10 ml YPD留宿作育物稀释至OD600值为0.2~0.4;
(4) 在28~30℃摇床中继承作育3~6hr,使其OD600值到达0.6~1.0;
(5) 于室温1500g离心5 min网络酵母细胞,弃上清;
用10ml洗液洗酵母细胞,随后于室温1500g离心5 min离心网络细胞,弃上清;
(7) 用1 ml TE/LiAc重悬酵母细胞,以每管50μl分装。
酿酒酵母细胞的转化
(1) 取50μl感觉态细胞,再插手待转质粒各2μl,混匀;
(2) 插手500μl 转化用溶液(PEG/LiAc,二甲亚砜),弹击管壁混匀;
(3) 30℃水浴1hr,隔15min弹击管壁混匀;
(4) 插手1毫升YPD作育液,30℃摇床作育1小时
(5) 3500g离心5 min ,留沉淀,弃上清;
沉淀用150μl TE重悬,涂响应的SD平板;将平板倒置于30℃作育。
相关标准:
GB/T 10781.3-2006 米香型白酒
GB/T 10781.1-2006 浓香型白酒
GB/T 10781.2-2006 清香型白酒
GB 15037-2006 葡萄酒
GB 4927-2008 啤酒
GB/T 13662-2008 黄酒
GB 2757-2012 蒸馏酒及其配制酒
GB 2758-2012 发酵酒及其配制酒
GB 10343-2008 食用酒精