检测说明:
1.检测方法
《消毒技术规范》2002版2.1.3空气消毒鉴定试验
2.试验对象
毒株:冠状病毒HCoV-229E(VR-740)
细胞:Huh-7细胞
3.试验设备
试验舱(30m3)、采样泵、气溶胶发生器、液体撞击式采样器
4.试验条件
1)环境温度:20-25℃
2)环境湿度:50-70 %RH
5.试验步骤:
1)调节试验舱的温度、相对湿度至试验要求;
2)将使用的器材一次放入试验舱内,将舱门关闭;
3)开启气溶胶发生器雾化病毒,同时使用风扇搅拌,雾化病毒完成后静置一定时间;
4)分别对对照组和实验组进行净化前的采样;
5)在试验组试验舱内进行净化,对照组试验舱做对照;
6)作用至规定时间,对试验组和对照组同时采样;
7)检测回收样本病毒滴度,并按照下列步骤进行:
a)10倍倍比稀释上述回收液;
b)将稀释液加入含生长至单层的Huh-7细胞的96孔细胞培养板上,并设置正常对照组,加等量培养液;
c)置于37℃,5%CO2的培养箱中孵育60 min后弃去上清液,加入双抗400 IU/mL 的维持培养液继续孵育3~5天,每天观察细胞增长状况;
d)当接种病毒的Huh-7细胞出现变圆或缩小等病变现象时,记录产生细胞病变的情况;
e)根据Reed-Muench公式计算半数感染量TCID50;
8)计算样本中病毒滴度和杀灭率,试验重复三次。
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