1 范围
本标准规定了采用高效液相色谱法测定花生黄曲霉毒素B1含量的方法。
本标准适用于花生中黄曲霉毒素B1的测定。
本方法检出限为1.0μg/kg。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
GB 5491 粮食、油料检验扦样、分样法
GB 6682 实验室用水规定(GB 6682-1992，eqv ISO 3696-1987)
3 原理
样品中黄曲霉毒素B1经提取浓缩、衍生化，反相C18柱分离后，在激发波长365mm，荧光波长440nm检测，外标法定量，计算样品黄曲霉毒素B1含量。
4 试剂
下列试剂除注明外均为分析纯，水为GB 6682 规定的二级水。
4.1 甲醇，色谱纯。
4.2 乙腈，色谱纯。
4.3 甲醇溶液(含4%氯化钠)，称取4g氯化钠(NaCl)溶于70mL甲醇和30mL水的混合溶液。
4.4 三氟乙酸。
4.5 石油醚(60℃~90℃)。
4.6 三氯甲烷。
4.7 黄曲霉毒素B1标准储备液，10mg/L。
5 仪器设备
5.1 天平，感量±1mg。
5.2 切片机。
5.3 粉碎机。
5.4 旋涡混合器。
5.5 超声波清洗器，功率不低于50W。
5.6 干热氮吹仪，控温精度50℃±2℃。
5.7 中速定性滤纸。
5.8 烘箱，控温精度50℃±2℃。
5.9 0.45μm有机相滤膜。
5.10 Nova-pak C18色谱柱(3.9mm×150mm)。
5.11 液相色谱仪(带荧光检测器)。
6 取样
按GB 5491 执行。
7 试样的制备
样品中的水分及挥发物含量超过10%时，在45℃左右的条件下通风干燥。将干燥的花生样品在切片机中切片至0.5mm左右，再经粉碎机粉碎，过0.42mm筛。
8 分析步骤
8.1 提取
称取20g(精确至10mg)样品，置于250mL具塞锥形瓶中，加60mL甲醇溶液(4.3)。50℃±2℃水浴超声提取5min(每隔1min取出旋涡混合1次)，过双层中速定性滤纸(5.7)，收集滤液于小烧杯中取滤液10mL于试管a中，加入5mL石油醚(4.5)，旋涡混合30s，静置2min，待分层后，弃上层，取下层溶液5mL于试管b中，加入5mL三氯甲烷(4.6)至试管b中，旋涡混合10s，静置2min，取出上层于试管c中，再加入5mL三氯甲烷(4.6)至试管b中，旋涡混合10s，静置2min，取上层。合并两次提取液于试管c中。
8.2 柱前衍生
将提取液置于干热氮吹仪(5.6)50℃恒温吹干，加入200μL衍生试剂(4.4)，盖好塞子，旋涡混合30s，50℃烘箱中衍生5min，置于干热氮吹仪(5.6)50℃恒温吹干，用1mL流动相溶解，过有机相滤膜(5.9)，滤液用液相色谱分析。
8.3 色谱分析
8.3.1 取黄曲霉毒素B1标准储备液(4.7)，用甲醇(4.1)稀释至20μg/L、40μg/L、80μg/L、160μg/L、320μg/L标准使用液连同样品依次进样，进行液相色谱检测，建立工作曲线。
8.3.2 色谱条件：流动相：乙腈+甲醇+水=13+12+75，流速：0.8mL/min，进样量10μL，柱温30℃，检测器：EX：365nm，FM：440nm
9 结果计算
试样中黄曲霉毒素B1含量以质量分数W计单位以微克每千克表示(g/kg)，按公式(1)计算：
W=m1×V1xD/V2×1000x1000/m （1）
式中：
m1——从工作曲线上计算出进样体积样品中黄曲霉毒素B1质量，单位为微克(pg)；
V1——加入流动相体积的数值，单位为毫升(mL)；
V2——进样体积，单位为微升(L)；
D——样液的总稀释倍数；
m——试样质量，单位为克(g)。
计算结果保留小数点后一位。
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