医疗器械无菌检验常见问题答疑

　　百检网资讯：Q1、菌种如何管理？
　　答：菌种如何管理——**微生物实验室要制定菌种管理规程和操作流程，包含：（1）目的；（2）范围；（3）职责（采购入库记录、支出领取记录）、使用记录（复苏、传代、接种、保藏、使用、销毁等记录）和（4）检测人员及批准人员。
　　Q2、防护服的无菌检验？无菌方法适用性试验？
　　答：防护服的无菌检验方法：按2020版《中国药典》中直接接种方法按表2取规定检验数量，再按《中国药典》1101中表3中的第三例医疗器械外科敷料规定量要求。取规定数量供试品，无菌操作，打开每个供试品剪去产品代表性部分，取*少检验规定量约1*3cm大小，分别等量接种FTM和TSB两种培养基：培养、观察、结果判定。
　　无菌方法适用性试验：主要是对照组与含供试品的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计。目的：确认方法是否适合该产品在该条件下的无菌检查。
　　Q3、黑曲霉的制备与保存？
　　答：黑曲霉的制备：将黑曲霉的孢子新鲜培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液进行10倍递增梯度稀释，选择至少3个适宜稀释剂进行倾注或涂布至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20℃～25℃培养5～7天，进行计数。制成规定的小于100cfu的孢子悬液。孢子悬液置于4～8℃冰箱冷藏保存，可在验证过的储存期内使用，也可将孢子悬液采用甘油1:1等体积混合于离心管中，于-20℃冰箱内保存；可在1年内使用。
　　Q4、车间微生物和无菌室分别做什么？
　　答：分别都要做车间的微生物室和无菌室环境洁净度监测参数是否在合格范围内。包含检测：温湿度，静压差、风速、换气次数、尘埃粒子、浮游菌、沉降菌等。
　　Q5、请问产品批出厂的无菌检验采用哪种法规？
　　答：检验数量及检验接种量分别按照《中国药典》1101中表1中和表3规定进行。
　　Q6、菌种如何传代、分离？
　　答：先取少量约1ml复苏菌液至适宜的液体培养基中进行增菌，液体培养基增菌至规定时间18—24小时，再取少量培养液至适宜固体培养基上划线在规定条件下培养；再取固定培养基上的培养出单一的菌落进行分区划线即可。
　　Q7、组合类产品的供试液的制备，比如引流袋与导管的组合，是内外表面都需要吗？
　　答：是的。
　　Q8、针对包类产品，在无菌检查时如何取样合适？由于包内配件多，不可能同时都接种到培养基中，所以只能取部分样品进行接种，在这种情况下，如果在一包样品中取等量的样品分别接种到两种培养基中是否合理？
　　答：小型配件或可破坏性的采用直接接种法，大件的取浸提液采用薄膜过滤法。
　　Q9、非无菌产品在药典需要做供试品菌种对照是什么目的？
　　答：非无菌产品按《药典》检查需氧菌总数和真菌总数不需要做阳性对照。但非无菌产品检测控制菌检查时需要做阳性对照。阳性对照目的：1、验证培养基的适用性；2、是确认试验是否成立；3、验证菌种的生物学特性是否符合。
　　Q10、灵敏度检查怎么看呢？
　　答：试验组和对照组没有区别，都生长良好，即判定灵敏度符合规定。
　　Q11、每批产品都要做无菌检查和灵敏度检查吗？
　　答：是每批产品都要做无菌检查，是每批培养基都要做灵敏度检查。两者要分清楚检查目的。
　　Q12、方法适用性验证啥情况下需要再验证？怎么制定再验证周期？
　　答：当检查方法和供试品的性质没有发生变化也不会影响微生物检出，方法适用性试验不需要重新验证。
　　当检查方法和供试品的性质发生变化、也会影响微生物结果检出，方法适用性试验需要重新验证。
　　Q13、大型医疗器械怎么用薄膜过滤法？浸提液的多少有要求？还是说用500ml浸提后抽滤用薄膜在液体培养基培养或者用浸提液直接取1ml配比10ml液体培养基培养呢？
　　答：参考：按《中国药典》1101薄膜过滤法中（具有导管的医疗器械（输血、输液袋）供试品的制备方法及接种方法。
　　Q14、请问医疗器械剪碎后体积大概为50ml，是选用直接接种法还是薄膜过滤法进行检测呢？
　　答：无论哪种方法应先做方法适用性试验，选择适宜的方法适合该产品无菌检查方法。若直接方法一定要按照药典中接种比例规定原则，若选择薄膜法要注意冲洗量的规定原则。
　　Q15、供试液做阳性对照的时候，金黄色葡萄球菌、铜绿、生孢梭菌、枯草、黑曲霉都长菌了，就白念没有长菌是菌种问题还是供试液问题呢？
　　答：说明该供试液含有抑菌性；对白色念珠菌有抑制成分。
　　Q16、菌种用完后如何避免环境污染？或者在送往灭菌途中防止污染？
　　答：采取湿热高压灭菌（121°C，20min ）必须达到灭菌效果，再废弃处理。
　　Q17、培养基ph在灭菌前还是灭菌后调试？
　　答：按试验要求，灭菌前或灭菌后都可以调试。但灭菌前调试要将ph调至符合范围内，再增加0.2至0,4数据，因为高压灭菌后要降低0.2至0.4数据。
　　Q18、手术电*只取接触人体的部分做无菌检查，可以吗？
　　答：不可以，应该取整个产品浸提液做无菌检查。
　　Q19、空白对照就是纯化水吗？
　　答：不单是纯化水，任何试验空白对照都是取本次试验相应的溶剂作为空白对照。
　　Q20、考虑到实际问题，按照GB14233. 2只取3个供试品（1个TSB、1个FTM、1个阳性对照）做无菌检查，是否合规？
　　答：按药典要求是不合规的。因为产品检查数量少，就增大无菌检测合格判定的风险。
　　Q21、无菌方法验证与无菌方法适用性检查有区别吗？验证一般要求三次是不是适用性检查试验需要做三次平行试验？
　　答：无菌方法验证与无菌方法适用性检查没有区别；都是选择适宜的方法适合该产品无菌检查。方法供试品无菌检查方法适用性只做一次，没有要求做三次平行试验。
　　Q22、防护服属于外科用敷料棉花及纱布这个范畴是吗？
　　答：属于外科用敷料类。
　　Q23、带导管的一次性医疗器械，冲洗的量有要求吗？
　　答：参考按《中国药典》1101薄膜过滤法中（具有导管的医疗器械（输血、输液袋）供试品的制备方法及操作方法。
　　Q24、直接接种法，一般是用什么容器培养的呢？
　　答：玻璃试管及匹配的透气胶塞。可根据供试品接种量的需求，试管规格可选择25ml、50ml、100ml等。
　　Q25、对 0.45um的非无菌滤膜进行高压蒸汽灭菌之后会对其孔径大小有影响吗？
　　答：有影响。尽量选择已灭菌独立包装的滤膜。
　　Q26、无菌方法学再验证中，产品发生怎样的变化需要重新验证了，产品增加一个加强筋、增加一个保护帽需要重新验证吗？
　　答：无论是方法还是产品只要变化都要进行重新验证。
　　Q27、对于高附加值三类医疗器械，如果按照应该药典中的样品量进行检测，费用过高（超过10w），能不选怎么多样本吗？
　　答：根据具体情况，具体分析，但要确保不会影响产品结果有效性保证。
　　Q28、3ml无菌注射器供试液如何制备，供试液量为多少？
　　答：供试液量取半量。（检验接种量按照《中国药典》1101中，表3**列液体制剂，第二行1ml与40ml之间规定进行）。
　　Q29、我们的口罩从传递窗进入需要开紫外灯吗？开了会不会影响测试结果？
　　答：口罩外包装经过75%消毒后，从传递窗进入无菌室，若短时间打开紫外灯15”左右，不会影响检测结果。
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