苯并(α)芘是一种强致癌化合物，被国际癌症研究中心列为2A类致癌物，会对人体健康造成潜在威胁。人体中的苯并(α)芘从食物中的摄入量高于从空气和饮用水中的摄入量，而从食用油中的摄入量占食物中摄入量的1/3[1]。GB2716–2005[2]规定，食用植物油类产品中苯并(α)芘的安全限量为不超过10μg/kg。目前，苯并(α)芘的检测方法有荧光分光光度法[3]、液相色谱–紫外检测器法[4]、液相色谱–荧光检测器法[5–7]等。测量不确定度在实验室间比对、测量临界值的判断、方法的确认及检测工作国际化等方面具有重要意义。根据JJF1059–1999[8]的要求，笔者对高效液相色谱法测定植物油中苯并(α)芘含量的测量结果进行了不确定度评定。
1实验部分
1.1主要仪器与试剂
高效液相色谱仪：1100型，配荧光检测器，美国安捷伦公司;中性氧化铝小柱;乙腈、甲苯、四氢呋喃：均为色谱纯。
1.2色谱条件
色谱柱：多环芳烃分析柱(4.6mm×250mm，5μm);流动相：乙腈–水(体积比为88∶12)，流速为1.0mL/min;荧光检测器：发射波长为406nm，
激发波长为384nm。
1.3溶液配制
苯并(α)芘标准溶液：精确称取12.5mg苯并(α)芘标准样品于25mL容量瓶中，用甲苯溶解，定容。分别用甲苯稀释成系列浓度的标准溶液，用以绘制
标准工作曲线。样品溶液：称取约0.4g植物油样品，用2mL石油醚溶解稀释。将稀释液过层析柱，向层析柱中加入20mL石油醚，洗脱，洗脱速度为1mL/min，收集洗脱液。将洗脱液在65℃的水浴中旋转蒸发至1mL，转移至样品瓶中，于35℃下氮吹至干，注入100μL乙腈四氢呋喃混合溶液，涡旋溶解，待测。
2数学模型
样品中苯并(α)芘含量测定采用外标法定量，结果计算公式为：
3不确定度的主要来源
3.1利用标准曲线得出试样中苯并(α)芘的浓度引入的不确定度包括标准样品引入的不确定度，标准工作液配制时玻璃仪器校准引入的不确定度、温度变化引入的不确定度及标准曲线拟合引入的不确定度。
3.2样品称量引入的不确定度
由天平的*大允许误差引起。
3.3体积引入的不确定度
由定容体积和进样体积的不确定度组成。
3.4样品处理过程引入的不确定度
测试样品的制备过程非常复杂，需经过均质、溶液转移、过滤、固相萃取等步骤，每一步操作都会引入不确定度，要采用检测方法确认的有关数据，如回收率对制样过程引入的不确定度进行评定。
4不确定度分量的评定
4.1由标准曲线求得试样中苯并(α)芘的浓度引入的相对标准不确定度
4.1.1标准样品纯度引入的不确定度在苯并(α)芘标准样品证书上查得其纯度为(99.6±0.5)%。在95%置信区间内，包含因子k=2。由苯并(α)芘纯度引入的相对标准不确定度：u1=0.5%/2=2.5×10–3
4.1.2标准物质称量引入的不确定度
用精确至0.1mg的电子分析天平称取苯并(α)芘标准样品，称量过程所引入的不确定度来自天平校准。天平校准的允许误差*值为±0.1mg，按正态分布，容量因子k=2，称样量为12.5mg，则称量标准样品时天平引入的相对标准不确定度：
4.1.3玻璃量具引入的不确定度
根据JJG196–2006[9]，1mLA级分度吸量管允许*大误差为±0.008mL，按均匀分布，k=3，则1mLA级分度吸量管引入的相对标准不确定度[10]：
同理，查JJG196–2006得，5mLA级分度吸量管允许*大误差为±0.025mL;10，25，100mLA级单标容量瓶的允许误差分别为±0.020，±0.030，±0.10mL。以上各量按均匀分布，k=3，则各量引入的相对标准不确定度：
将以上数据合成，得玻璃量具引入的相对标准不确定度：
4.1.4温度变化引入的不确定度
实验室的温度波动范围一般为±3℃，水体积膨胀系数为2.1×10–4/℃，玻璃的膨胀系数为9.75×10–6/℃(可忽略不计)。计算标准不确定度时按照均匀分布，k=3，各吸量管及容量瓶因温度变化引入的不确定度列于表1。
将表1中数据合成，得温度变化引入的相对标准不确定度：
4.1.5标准曲线拟合引入的不确定度
用液相色谱仪分别测定5种浓度的苯并(α)芘标准溶液，每种浓度测3次，得到相应的峰面积A，测定结果见表2。实验数据用*小二乘法进行拟合，得到直线方程y=a+bx，a为截距，b为斜率。
由表2数据计算得：b=1095.559，a=0.739。标准曲线的标准偏差s=0.7317。
对被测样品测量两次，由下式[8]计算得苯并(α)芘浓度x0的标准偏差估计值s(x0)=5.037×10–5：
由标准曲线计算得被测样品浓度的相对标准不确定度：
则由标准曲线计算得试样中苯并(α)芘的浓度引入的相对标准不确定度：
4.2样品称量引入的不确定度
同4.1.2，用感量为0.1mg的电子分析天平称取0.4g植物油样品，称量引入的相对标准不确定度：
4.3样品处理液定容引入的不确定度
根据JJG196–2006，0.1mLA级分度吸量管允许*大误差为±0.002mL，按均匀分布，k=3，则0.1mLA级分度吸量管的相对标准不确定度：
如表1，温度变化引入的相对标准不确定度：u17=3.64×10–4，则样品处理液定容引入的相对标准
不确定度:
。
4.4试样均匀性和处理操作过程引入的不确定度
测量重复性主要受实验人员在样品处理过程中的操作一致性、样品均匀性和仪器性能的影响，该不确定度属A类评定，利用添加2.20μg/kg水平10次样品回收率测定结果(见表3)进行计算，标准不确定度采用平均值的标准偏差进行评定。样品处理过程引入的不确定度为：
4.5合成标准不确定度
由上述各相对标准不确定度合成植物油中苯并(α)芘含量测定的相对标准不确定度为：
4.6扩展标准不确定度
根据测量不确定度评定指南对一般实验室的要求[8]，在置信概率P=95%时，取k=2，植物油中苯并(α)芘含量测定结果的相对扩展不确定度为：U95,rel=kurel(X)=2×0.0126=2.5%由实验数据的平均值计算得该植物油中苯并
(α)芘含量的*佳估计值：X=2.06μg/kg，故扩展不确定度：U95=XU95,rel=0.05μg/kg。
4.7测量结果报告
按照GB/T22509–2008检测方法，当取样量为0.40g时，植物油中苯并(α)芘的含量测定结果为(2.06±0.05)μg/kg，k=2。
.png)
