呕吐毒素的高效液相色谱HPLC检测方案

百检网 2022-11-21

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)又称呕吐毒素(vomitoxin),主要是由镰刀菌的某些种产生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物——单端孢霉烯族化合物中的一种。DON的主要产生菌是禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum),据报道也有其它一些镰刀菌可产生。DON的化学名为3a,7a,l5一三羟基一l2,l3一环氧单端孢酶一9一烯I8酮,是一种B型单端孢酶烯族化合物,为一种倍半烯衍生物。分子量为296.3,分子式为C15H20O6,结晶为无色针状,熔点为l5l~153℃,α,β一不饱和酮基致使其在短波紫外下有吸收峰。但此紫外吸收与其它许多物质紫外吸收相重叠,并非特征性的。DON易溶于水和*性溶剂甲醇、乙醇、乙腈、丙酮及乙酸乙酯,但不溶于正己烷和乙醚。1988年Shepherd和Gilbert证实DON在有机溶剂中稳定,因此乙酸乙酯和乙腈是*适合的溶剂,长期储存更是如此。DON耐热、耐压,弱酸中不分解,加碱及高压处理可以破坏其部分毒力。DON的耐藏力也很强。据报道病麦经4年的贮藏,其中的DON仍能保留原有的毒性。

DON广泛存在于全球,主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物,也污染粮食制品,人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。另外,它还常与其它的霉卤毒素如黄曲霉毒素共同污染农作物,进入人体后可以相互影响。近年来发现DON可能与人类食管癌、IgA肾病有关,对人类及动物的健康构成威胁。DON属于剧毒或中等毒物,研究表明,DON在体内可能有一定的蓄积,但无特殊的靶器官,具有很强的细胞毒性。人畜摄入了被DON污染的食物/饲料后,会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状,严重时损害造血系统造成死亡,但不同的动物对DON的敏感程度不一,猪是*敏感的动物。研究表明,DON可能对免疫系统有影响,有明显胚胎毒性和一定致畸作用,可能有遗传毒性,但无致癌、致突变作用。由于DON的危害严重,引起了各国的普遍重视。谷物及饲料中DON的含量有严格的限量标准。我国谷物中DON的限量标准为1.0mg/kg。

标准储备液:准确称取一定量标准品,用甲醇+乙腈(1+1)溶解,配成0.1mg/ml的标准液。标准工作液:根据使用需要准确吸取一定量的呕吐毒素储备液,用流动相稀释,分别配成相当于1µg/ml、2µg/ml、5µg/ml、10µg/ml、20µg/ml的标准工作液。用0.45µm的有机系滤膜过滤,精密量取10µL,注入液相色谱仪,记录色谱图。
样品处理:选取有代表性的样品粉碎过40目筛,称取25g(精确至0.01g)样品于250mL具塞三角瓶中,加5.0g聚乙二醇,加入100mL水,置于回旋式震荡期中200r/min震荡20min,静置,用定量滤纸过滤后再用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,待净化。

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