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蚯蚓急性毒性试验有效性
对照组的死亡率在试验结束时不能超过10%,试验是有效的。
5仪器设备
试验室常规仪器设备和特殊设备:
——蚯蚓养殖(见附录A);
——滤纸:80g/~85g/,厚度左右,中级;
——人工土壤试验基质。
泥炭藓灰10% (pH值尽可能接近~,无明显植物残体,磨细,风干,测定含水量);
高岭黏土20%(高岭石质量分数大于30%);
石英砂70%(50μm~200μm粒径的细砂质量分数在50%以上);
加入碳酸钙调pH值为±(见参考文献(6));
以正确比例混合人工土壤的各个干燥组分。为了混合均匀,可采用大型试验室搅拌器或小型水泥电动搅拌机。然后取少量上述样品置于105条件下烘干称重,测定其含水量。加入去离子水使其含水量达到干重的35%左右,混合均匀。混合物不能过湿,当挤压人造土壤时不能有水分出现。
——玻璃容器:结晶皿,或加有盖玻璃或具孔塑料板的1L烧杯。
——培养装置:光照度400lx~800lx,温度控制±2的培养箱。
试验生物
推荐的蚯蚓品种是赤子爱胜蚓Eisenia foefida(Michaelsen),虽然这种蚯蚓不是典型的土壤品种,但它存在于富含有机质的土壤中,对化学物质的敏感性与真正栖息在土壤中的蚯蚓类似,其生命周期短,在20的条件下,孵化需要3~4周,7~8周即可发育成熟。它繁殖能力强,一条蚯蚓可以在一周内产2~5个蚓茧,每个蚓茧可孵出几条蚯蚓。它易于在含各种有机废物的土壤中饲养,蚓茧容易购得或从一个来源分发,这有利于确保采用同一品系(见附录A)。
赤子爱胜蚓存在两个分支,有些分类学家将其分开(见参考文献(1)),其形态很相象,但的环节上有一典型的横纹或环带,而 andrei则没有,但带有斑驳的红色。如果可能宜采用 foetida。当必须使用某种方法时,也可以使用其他品种。
选择二月龄以上,体重300 mg~600 mg的健康蚯蚓供试验用。
6试验方法
滤纸试验
采用长8cm,直径3cm的平底玻璃管。内壁衬铺滤纸,滤纸的大小以不重叠为宜。
受试物溶于水(溶解度大于1000mg/L)或适宜的有机溶剂(如丙酮、正己烷、氯仿),在已知浓度范围内配成浓度系列溶液。用移液管向每个玻璃管移入1mL受试物溶液,用过滤的压缩空气吹干,气体流速不要太快。在干燥过程中,水平旋转玻璃管(对不易溶解于水或有机溶剂中的物质必须重复几次上述过程),以获得试验所需的受试物在滤纸上的沉积量。对照组用1mL的去离子水或有机溶剂处理。干燥后在每一玻璃管内加1mL去离子水以湿润滤纸,用留一小孔的塞子或塑料薄膜封住玻璃管口。