细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。通过分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去,是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老和死亡的细胞;同时,多细胞生物可以由一个受精卵,经过细胞的分裂和分化,*终发育成一个新的多细胞个体。细胞增殖检测可以指示肿瘤细胞增殖活性、目的基因瞬转/稳转细胞系的细胞增殖活性,在小分子化合物/多肽等药物筛选及功能安全性研究、中药/中间体等药物筛选及功能安全性研究、目的基因过表达的基因功能研究、目的基因RNAi干扰的基因功能研究中发挥重要作用。
细胞毒性是由合成化合物、细胞自然产生毒性或免疫调节细胞(如细胞毒性T 淋巴细胞,自然杀伤细胞等)引起的单纯细胞杀伤事件。同细胞凋亡及坏死不同,细胞毒性不是指某种特定的细胞死亡机制,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。细胞毒性分析可以使用于基础研究和药物发现,以筛选有毒化合物库。可产生细胞毒性反应的化合物可在后续筛选中淘汰掉;或者将靶向快速分裂细胞的化合物选定为癌症治疗的候选化合物。
常用的细胞增殖/毒性检测技术有很多,我们采用MTT,CCK-8两种方式为客户进行细胞增殖与毒性检测服务。
细胞增殖/毒性检测服务—MTT法:
二甲基噻唑二苯基四唑溴盐 (MTT),为淡黄色粉末,水溶性好。能被各种活细胞(除红细胞外)摄取,在线粒体内被脱氢酶还原,由黄色可溶性溶液转变为不可溶性的紫色甲臜(formazan)颗粒,用一定的裂解液裂解细胞并溶解甲臜,再通过测定溶液的吸光值就可以推测细胞的增殖程度。MTT法简单快速、准确,是在细胞毒性试验及细胞增殖等实验中经常使用的一种方法。
细胞增值/毒性检测服务——CCK-8法:
CCK-8(Cell Counting kit-8)试剂中含有WST-8,其化学名为:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜染料(Formazan dye)。生成的甲臜物地数量与活细胞的数量成正比,因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。