由于目前全球化的发展,世界各地区之间的人流物流日益广泛和频繁,病原菌也会随着这种流动而迅速扩散,并且不像以前要由邻接地区由近而远的扩散,而是直接跨越地区、造成国家之间乃至洲之间的迅速扩散。因此,将先进的技术和检测方法应用于我们的实际工作,可准确的检测和有效预防因金黄色葡萄球菌引起的食物中毒及各类感染性疾病。现就其检测方法做一总结。
1 传统常规培养检测方法
1.1 直接涂片镜检
取标本涂片,革兰氏染色后镜检,可见球形、单个、成对和葡萄串状排列,革兰氏染色阳性,无芽胞,无荚膜。根据细菌形态、排列和染色性可作出初步诊断。
1.2 分离培养与鉴定
将标本接种于血琼脂平板,经37℃培养24h后形成圆形、光滑、大而凸起、湿润、不透明的菌落,菌落呈金黄色或者白色,有透明溶血环。接种甘露醇培养基经37℃培养24h后,形成淡橙黄色菌落。在Baerd-Parker平板中经37℃培养24h后,菌落为圆形、光滑突起、湿润,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为一浑浊带,在其外层有一透明圈。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在7.5%氯化钠肉汤中生长,因此利用它的这个特性进行污染标本的分离。在纯培养分离好的平板上挑取菌落配置菌悬液,在VITEK2微生物鉴定系统用GP卡鉴定。
1.3 血浆凝固酶试验
吸取0.5ml 兔血浆与0.5ml金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24h 培养物充分混匀,置36±1℃培养,每隔30min 观察一次,连续观察6h,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性。同时做阴阳性对照。
1.4 耐热核酸酶试验
将24h 肉汤培养物沸水浴处理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA 平板,(36±1)°C 培养24h,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
金黄色葡萄球菌的传统实验室检测方法经典、可靠,仍是实验室一直沿用的检测方法。但操作复杂,所需事间长,尤其在突发公共卫生事件需要进行流行病学调查和溯源时,很难满足准确、快速溯源的需要。
2 对金黄色葡萄球菌肠毒素的检测方法
2.1从分离菌株培养物中提取葡萄球菌肠毒素
待测菌株接种营养琼脂斜面,37℃培养24h,用5ml生理盐水洗下菌落,倾入60ml产毒培养基中,每个菌种种一瓶,37℃震荡培养48h,震速为100次/min,吸出菌液,100℃加热10min,8000r/min离心20min,取上清液100ul进行试验。