HJ 1215-2021 水质浮游植物的测定滤膜-显微镜计数法

1 适用范围

本标准规定了测定水中浮游植物的滤膜-显微镜计数法。本标准适用于地表水中浮游植物的快速测定。

当样品大过滤体积为 1000 ml 时，方法检出限为 40 cells/L。方法检出限计算方法详见附录 A。

2 规范性引用文件

本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是未注日期的引用文件，其新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB/T 14581 水质湖泊和水库采样技术指导

HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范

HJ 494 水质采样技术指导

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

浮游植物 phytoplankton

在水中营浮游生活的微小藻类植物，通常浮游植物就是浮游藻类，包括原核的蓝藻和其它各类真核藻类。

3.2

计数单位 counting unit

显微镜视野下选择计数的小单元，如细胞。

3.3

浮游植物密度 density of phytoplankton

单位体积内浮游植物的细胞数，cells/L。

3.4

显微镜计数视野 microscope counting field

显微镜视野中限定一定面积的区域，用来定量计数浮游植物。

4 方法原理

样品通过一定孔径的滤膜，群体、丝状体及单细胞浮游植物截留在滤膜上，滤膜经透明处理后在显微镜下镜检。

5 试剂和材料

除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。

5.1 碘（I2）。

5.2 碘化钾（KI）。

5.3 甲醛溶液：w＝37%～40%。

5.4 鲁哥氏碘液：

称取 60 g 碘化钾（5.2）溶解在 100 ml 水中，再加入 40 g 碘（5.1），充分搅拌使其完全溶解，加水定容至 1000 ml，转移至棕色磨口玻璃瓶，室温避光保存。

5.5 显微镜浸没油：nD23=1.515 或nE23=1.518，配透明玻璃滴棒。

5.6 滤膜：混合纤维素酯膜，直径 25 mm，孔径 0.45 μm～3 μm。

注：每批次滤膜应进行水化测试和油透明测试，满足可水化和可透明要求后方可使用。将 1 张未使用的滤膜放入盛水的烧杯中，若滤膜被水完全浸润，则滤膜可水化。取 1 张未使用的滤膜，置于滴有显微镜浸没油的载玻片上，若滤膜被浸没油完全浸润，则滤膜可透明。

6 仪器和设备

6.1 25 号浮游生物网：网孔直径 0.064 mm，网呈圆锥形，网口套在铜环上，网底端有出水开关活塞。

6.2 定性采样瓶：30 ml～100 ml 广口聚乙烯瓶。

6.3 采水器：不锈钢或有机玻璃材质，圆柱形。容量和深度规格要满足采样要求。

6.4 定量采样瓶：1 L～2 L 广口聚乙烯瓶。

6.5 冷藏箱。

6.6 真空抽滤装置：包括漏斗（直径 25 mm，容积 200 ml）、多孔聚酯滤膜支撑板、收集瓶、真空泵（相对真空度≤－17 kPa，可调）。

6.7 载玻片：25 mm×76 mm。

注：载玻片和盖玻片使用前应用浓盐酸和乙醇浸泡。若条件允许，选择可直接使用的载玻片或盖玻片。

6.8 盖玻片：25 mm×25 mm。

6.9 无齿组织镊子。

6.10 载玻片晾片板：适配同规格载玻片。

6.11 烘箱：70 ℃±2 ℃，温度可调。

6.12 正置生物显微镜或倒置生物显微镜：物镜 4×、10×、20×、40×；目镜 10×或 15×。

6.13 载物台测微计：又称镜台测微计，1 mm/100 DIV，分划值为 0.01 mm。

注：DIV 指等分格，1 mm/100 DIV 即 1 mm 等分成 100 格。

6.14 惠普尔目镜分划板（Whipple grid）：边长为 7 mm～10 mm 的正方形大格，划分为 100 个相同的正方形中格，位于中央的 1 个中格进一步划分为 25 个相同的正方形小格。

注：不具备惠普尔目镜分划板时，亦可使用同规格的网格型目镜分划板（即中央的中格未细分为 25 小格的网格型目镜分划板）。

6.15 计数器。

6.16 一般实验室常用设备。

7 样品

7.1 样品采集

7.1.1 定性样品

点位布设及采样频次按照GB/T 14581、HJ/T 91 和HJ 494 的相关规定执行。

使用 25 号浮游生物网（6.1）采集定性样品。关闭浮游生物网底端出水活塞开关，在水面表层至0.5 m 水深处以 20 cm/s～30 cm/s 的速度做“∞”形往复，缓慢拖动约 1 min～3 min，待网中明显有浮游植物进入，将浮游生物网（6.1）提出水面，网内水自然通过网孔滤出，待底部剩少许水样（5 ml～ 10 ml）时，将底端出口移入定性采样瓶（6.2）中，打开底端活塞开关收集定性样品。采集分层样品时，用 25 号浮游生物网（6.1）过滤特定水层样品，其他步骤同采集表层样品。定性样品采集完成后及时将浮游生物网清洗干净。样品采集后放入冷藏箱（6.5）冷藏避光运输。

如有定性样品采集技术规范，按技术规范有关要求执行。

7.1.2 定量样品

按照GB/T 14581、HJ/T 91 和 HJ 494 的相关规定采集定量样品。

使用采水器（6.3）采集 1 L～2 L 样品至定量采样瓶（6.4）中。若水体透明度较高，浮游植物数量较少时，应酌情增加采样体积。定量样品采集完成后，定量采样瓶（6.4）不应装满，以便摇匀。

注 1：有些浮游植物（如蓝藻）常上浮在水面或成片、条带分布，可在此水华密集区域采样作为峰值参考。注 2：定量样品采集应在定性样品采集之前。应保持固定时间段采样，以便结果之间可相互比较。

7.2 样品保存

7.2.1 定性样品

定性样品采集后应立即加入鲁哥氏碘液（5.4）固定，用量为水样体积的 1.0%～1.5%。镜检活体样品不加鲁哥氏碘液（5.4）固定。定性样品在室温避光条件下可保存 3 周；1 ℃～5 ℃冷藏避光条件下可保存 12 个月。活体样品 4 ℃～10 ℃冷藏避光条件下可保存 36 h。

7.2.2 定量样品

定量样品采集后立即加入鲁哥氏碘液（5.4）固定，用量为水样体积的 1.0%～1.5%。也可将鲁哥氏碘液（5.4）提前加入定量采样瓶（6.4）中带至现场使用。定量样品在室温避光条件下可保存 3 周；1 ℃～5 ℃冷藏避光条件下可保存 12 个月。

样品在保存过程中，应每周检查鲁哥氏碘液（5.4）的氧化程度，若样品颜色变浅，应向样品中补加适量的鲁哥氏碘液（5.4），直到样品的颜色恢复为黄褐色。

注：若样品需长期保存，应加入甲醛溶液（5.3），用量为水样体积的4%。