脊髓灰质炎病毒杀灭试验是什么?

百检网 2021-11-02
脊髓灰质炎病毒杀灭试验,主要目的是测定消毒剂对脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)灭活所需的剂量,以验证病毒污染物消毒实用剂量。脊髓灰质炎病毒杀灭试验的试验原理在于,用细胞感染法测定消毒剂作用前后(或实验组与对照组)样本中脊髓灰质炎的量,以细胞病变作为判断指标,确定各组病毒的感染滴度,计算消毒剂对脊髓灰质炎的灭活率。

脊髓灰质炎病毒杀灭试验分组
1)试验组。根据所测消毒剂对其他微生物的杀灭或灭活剂量估计,设定适宜的浓度与作用时间组(不少于1个浓度,3个作用时间),对作用时间的设计应不短于30s。
2)阳性对照组。用去离子水代替消毒剂,按试验组规定步骤加入脊髓灰质炎悬液进行试验和培养,观察脊髓灰质炎生长是否良好。
3)阴性对照组。用不含脊髓灰质炎的完全培养基作为阴性对照,观察所用培养基有无污染,细胞是否生长良好。

脊髓灰质炎悬液定量灭活试验的操作程序
1)从液氮中取出冻存的试验宿主细胞,在37℃温水中迅速融化,并用细胞维持液洗涤两次后,转种于加有10ml完全培养基培养瓶中。逐日观察细胞生长情况,在细胞长满单层时,用于消毒试验。
2)取出低温冻存的脊髓灰质炎-1毒株,37℃水浴融化,用细胞维持液作10倍稀释,然后接种于含已经长满单层细胞的细胞瓶内,置37℃温箱中,使与细胞吸附、生长。逐日观察病变,待3/4细胞出现病变时,收获病毒。收获时,将培养液取出,用超声波或反复冻融破碎宿主细胞,尽快离心,并将含病毒的上清液按每管1.Oml 分装于无菌离心管( 1.5ml)中,冷冻保存于-80℃备用。
3)取待测消毒剂,用灭菌硬水稀释至所需浓度的1.25倍,于20℃±1℃水浴中备用。
4)取100μ 1有机干扰物质与100μ 1病毒原液混合,于20℃+1℃水浴中作用5min,加入0.8ml待检消毒剂,立即混匀并记时。作用规定时间,立即取出0.1ml,加入中和剂中混匀;或用经鉴定合格的除药方法处理。
5)阳性(病毒)对照组试验中,用无菌去离子水代替消毒剂。
6)各组分别进行病毒滴度测定,可采用终点稀释法或噬斑法进行。
7)试验重复3次。
8)终点稀释法操作步骤:先用细胞维持培养液对待滴定样本做10倍系列稀释,然后在96孔培养板上滴定各稀释度样本中残留的病毒量,每个稀释度做4孔(各孔中应该已经长满单层的宿主细胞),在37℃,放置1h~2h,以确保残留病毒全部吸附在细胞上。取出培养板,更换细胞维持培养液。继续放入二氧化碳培养箱中(37℃,5% CO ₂)培养,逐日在显微镜下观察细胞病变,连续观察3d,逐孔观察并记录细胞病变情况。终点稀释法病毒感染滴度的计算:以半数细胞感染剂量表示。
9)噬斑法操作步骤:先用细胞维持培养液对待滴定样本做10倍系列稀释,然后接种于细胞培养瓶中,滴定各稀释度样本中残留的病毒量。接种细胞前,将生长致密的单层细胞中的培养液倾出,加入1ml待测样品,放置37℃吸符1h~2h,倾出样液,加入含0.8%琼脂的细胞维持液3m1,冷却后翻转细胞瓶,放置37℃培养48h~72h。然后每瓶细胞加入2m1甲醛溶液固定数分钟,用自来水冲洗后加结晶紫溶液染色数分钟,冲洗干净后计数。细胞瓶内圆形不着色的透明区即为一个蚀斑单位,每毫升测试样品中的病毒含量计算:pfu/m1=平板平均蚀斑数×稀释倍数。为了便于计数,病毒蚀斑数一般控制在每细胞瓶10pfu~30pfu。

脊髓灰质炎病毒杀灭试验的计算
平均灭活对数值按下式计算:设阳性((病毒)对照组平均病毒感染滴度的为No,试验(消毒)组平均病毒感染滴度为Nx。
平均灭活对数值= log No-log Nx

脊髓灰质炎病毒杀灭试验的评价规定
1)脊灰病毒灭活试验,可用于评价医疗器械、食具、物体表面和皮肤用化学消毒剂对病毒的灭活效果。病毒的灭活滴度,应达到4个对数值。
2)在正常情况下,3次试验的平均灭活对数值≥4.00,可判为对脊髓灰质炎病毒污染物消毒的实验室试验合格。同时,阳性对照组病毒滴度对数值应在5~7之间。

脊髓灰质炎病毒杀灭试验注意事项
1)操作人员应具有基本的病毒学实验工作经验,尽量使用移液器与无菌一次性吸头。
2)在杀菌试验中,每次均应设置阳性对照。
3)如使用病毒载体进行试验,可参照上述悬液定量试验程序,并遵照病毒学原理进行适当修改后使用。
 
更多脊髓灰质炎病毒杀灭试验的问题可咨询百检网。
 
 
 

百检能给您带来哪些改变?

1、检测行业全覆盖,满足不同的检测;

2、实验室全覆盖,就近分配本地化检测;

3、工程师一对一服务,让检测更精准;

4、免费初检,初检不收取检测费用;

5、自助下单 快递免费上门取样;

6、周期短,费用低,服务周到;

7、拥有CMA、CNAS、CAL等权威资质;

8、检测报告权威有效、中国通用;

客户案例展示

  • 上海朗波王服饰有限公司
  • 浙江圣达生物药业股份有限公司
  • 天津市长庆电子科技有限公司
  • 上海纽特丝纺织品有限公司
  • 无锡露米娅纺织有限公司
  • 东方电气风电(凉山)有限公司