那么化妆品舒缓功效评价的常用检测指标是什么?
化妆品舒缓功效评价主要有屏障修护、神经镇静和抗炎杀菌这三个检测指标。
以下分别从这三个指标来探讨化妆品舒缓功效的检测方法。
化妆品舒缓功效评价的检测指标:屏障修护
(1)透明质酸酶抑制率
透明质酸(HA)在维持皮肤水分和弹性、创伤愈合和血管形成等过程中起主要的作用,同时,透明质酸还参与血管扩张和过敏反应,因此与皮肤敏感也有很大关系。
透明质酸酶是HA特异性裂解酶,其过度活动会导致HA的降解,从而导致皮肤老化和炎症的发展与进展。
透明质酸酶抑制实验是*典型的抗敏活性评价体外方法,以透明质酸酶抑制率为指标评价物质的抗过敏活性,透明质酸酶抑制率越大则抗过敏活性越强。
(2)自由基清除能力
线粒体在电子传递的过程中产生的自由基会攻击细胞膜、蛋白质甚至 DNA,导致细胞的衰老甚至死亡,与多种疾病都有紧密关系。抑制自由基活性可以有效缓解外界刺激后产生的过量自由基作用下细胞结构功能的退化,进而维护包括皮肤在内各种器官的正常屏障结构。
(3)红细胞溶血实验
红细胞溶血实验*初用于替代Draize 兔眼实验,其原理在于测定从红细胞中漏出的血红蛋白的量来评价细胞膜的损伤程度,血红蛋白漏出量越多,损伤越大。
(4)皮肤角质层神经酰胺含量分析
神经酰胺是人体角质层脂质的重要成分,功能主要有调节皮肤水分流失(水合作用)、维持皮肤屏障功能、抗衰老和美白等等。有研究显示小鼠的表皮神经酰胺含量与皮肤机械屏障功能呈正相关且相互影响。
(5)皮肤屏障结构相关蛋白表达测定
比如TGM1(转谷氨酰胺1),它编码与膜相连的钙依赖性硫醇酶,具有转移氨基酸到蛋白质的谷氨酸残基上形成异肽键的能力,参与角质蛋白膜套过程中ε-(γ谷氨酰)赖氨酸交联的形成,是角质形成细胞终末分化组成蛋白膜套的关键步骤,是皮肤屏障功能的物质基础。
中间丝相关蛋白,如FLG(Filaggrin,即丝聚蛋白),LOR(Loricrin,即兜甲蛋白)和IVL(Involucrin,即内皮蛋白)等也是蛋白膜套形成的基础。
(6)表皮紧密连接相关基因表达
紧密连接是维持表皮机械屏障和通透性的重要结构,紧密连接蛋白包括Claudin-1、Occludin、ZO-1等等。ZO-1与紧密连接的其他成员密切相关,只要ZO-1受到破坏,紧密连接的功能就会随之改变。因此测定ZO-1相关蛋白的表达,可以用来评估屏障修复功效。
(1)降钙素基因相关肽
外界刺激下,钙离子内流入神经元,导致其释放降钙素基因相关肽(CGRP),进而引起一系列神经激活和血管扩张等免疫应答反应。研究表明,炎症部位的CGRP表达量显著增强,当外界刺激与活性物质同时作用于皮肤,通过测定CGRP量可以评估神经元信号传递,从而研究活性物质是否具有刺激条件下的神经镇静作用。
(2)香草酸亚型瞬时受体电位1通道蛋白(TRPV1)
外界刺激或包括缓激肽、神经生长因子等内源性物质都会激活TRPV1,从而引起钙离子内流,导致皮肤渗透性增加,产生刺痛、烧灼感。同时TRPV1还会促进释放包括P物质在内的神经源性炎症因子,进一步诱导炎症因子的分子,导致局部毛细血管扩张。
目前针对神经源性皮肤敏感开发的化妆品原料多为TRPV1表达抑制或功能拮抗剂,通过检测其表达量降低说明活性物具有舒缓面部不适感的抗敏功效。
化妆品舒缓功效评价的检测指标:抑制炎症反应
在细胞水平上,可以通过测定COX-2的表达量来评价活性物抑制炎症的功效。
同样也可以利用3D皮肤模型,通过UVB照射或SLS刺激Epikutis表皮模型来进行评估。
以SLS刺激为例,以地塞米松为对照条件,通过模拟皮肤受到化学刺激时的状态,检测组织活力、模型形态学变化和炎症因子的表达量,来评估活性物的抗炎功效。