1范围
本标准规定了化妆品中维生素B5(泛酸)及维生素原B5(D-泛醇)测定的高效液相色谱紫外检测法和高效液相色谱串联质谱法两种方法。
本标准适用于化妆品中维生素B5(泛酸)及维生素原B5(D-泛醇)的定量测定,高效液相色谱紫外检测法对泛酸、D-泛醇的检出限为30μg/g,定量限为100μg/g。高效液相色谱串联质谱法对泛酸、D-泛醇的检出限为30ng/g;定量限为100ng/g。
2.规范性引用文件
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GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分:总则与定义
GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3.原理
在水和与水不互溶的有机溶剂(如三氯甲烷或异辛烷等)形成的双液相体系中,维生素B5(泛酸及其盐类(如泛酸钠及泛酸钙))和维生素原B5(D-泛醇)均分布于水相,化妆品中油溶性成分易溶于有机相,而化妆品中的表面活性剂则富集于油水界面处。利用双液相体系可将维生素B5和维生素原B5与化妆品中油溶性成分及表面活性剂初步分离,亚铁氰化钾-醋酸锌共沉淀剂去除提取液中的大分子基质。在酸性条件下将泛酸和D-泛醇富集于固相萃取C18固定相上,脱除其他水溶性干扰物后,用40%甲醇水溶液洗脱,用反相高效液相色谱分离,紫外检测器或串联四级杆质谱检测,标准曲线外标法定量。
4.试剂和材料
除非另有说明,所用水为GB/T 6682中规定的一级水。
4.1 标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度见表1。
4.2 甲醇:色谱纯。
4.3 甲醇:分析纯。
4.4 甲酸:分析纯。
4.5 甲酸:色谱纯。
4.6 三氯甲烷：分析纯。
4.7 乙酸丁酯：分析纯。
4.8 异辛烷：分析纯。
4.9 0.2mol/L甲酸：移取3.8mL甲酸(4.4)，用水稀释定容至500mL。
4.10 0.1mol/L甲酸：移取1.9mL甲酸(4.4)，用水稀释定容至500mL。
4.11 醋酸锌溶液：移取21.9gC4H6O4Zn·2H2O(分析纯)，用0.2mol/L甲酸(4.9)溶解并定容至100mL。
4.12 亚铁氰化钾溶液：移取10.6gK4Fe(CN)6·3H2O(分析纯)，用水溶解并定容至100mL。
4.13 乙酸丁酯-三氯甲烷混合溶剂：乙酸丁酯(4.7):三氯甲烷(4.6)体积比(1+1)。
4.14 40%甲醇水溶液：甲醇(4.3):蒸馏水体积比(2+3)。
4.15 C18固相萃取小柱：200mg/3mL，使用前，依次用3mL甲醇(4.3)、3mL蒸馏水进行活化。
4.16 一次性针式样品过滤器：0.2μm,尼龙膜。
4.17 标准储备溶液:分别准确称取标准物质泛酸1.0g(或1.1g泛酸钠或者泛酸钙,折合为泛酸1.0g)和D-泛醇1.0g(以上质量均精确至0.1mg),用蒸馏水溶解定容至25mL,配置成浓度为40mg/mL的标准储备液于4℃～6℃条件下保存。
4,18 系列标准溶液A:**将泛酸和D-泛醇标准储备液(4.17)等体积混合配置成泛酸和D-泛醇浓度均为20mg/mL的溶液,然后用蒸馏水稀释配置成泛酸和泛醇浓度均分别为1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、800μg/ml、1000μg/mL的系列标准混合溶液于4℃～6℃条件下保存(适用于高效液相色谱紫外检测法)。
4.19 系列标准溶液B：用蒸馏水稀释泛酸和D-泛醇浓度均为100μg/mL的标准溶液(4.18),配置成泛酸和D-泛醇浓度均分别为1μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/L、800μg/L和1000g/L的系列标准溶液于4℃～6℃条件下保存(适用于高效液相色谱串联质谱法)。
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