1 范围
本标准规定了化妆品中八种水溶性色素樱桃红、食品红17、柠檬黄、桔黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝、亮蓝的液相色谱测定方法。
本标准适用于皮肤护理类和眼部修饰类化妆品中水溶性色素的测定。
2 原理
用水提取化妆品中的水溶性色素，提取液经离心过滤后，用高效液相色谱法进行测定。根据其保留时间定性，外标法定量。液相色谱-质谱法确证。
3 试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为二次去离子水或重蒸水。
3.1 甲醇：高效液相色谱级。
3.2 乙酸铵。
3.3 樱桃红标准物质：纯度≥97%。
3.4 食品红17标准物质：纯度≥97%。
3.5 柠檬黄标准物质：纯度≥97%。
3.6 桔黄标准物质：纯度≥97%。
3.7 苋菜红标准物质：纯度≥97%。
3.8 胭脂红标准物质：纯度≥97%。
3.9 亮蓝标准物质：纯度≥97%。
3.10 靛蓝标准物质：纯度≥97%
3.11 水溶性色素标准储备液：准确称取适量水溶性色素(精确到0.1mg)，以水配制成浓度均为l000μg/mL的标准储备溶液。根据需要用水稀释成适用浓度的标准工作溶液。冰箱冷藏保存，有效期1个月。
3.12 0.45μm水性滤膜。
4 仪器与设备
4.1 高效液相色谱仪：配有二*管阵列检测器。
4.2 微量进样器：10μL。
4.3 超声波清洗器。
4.4 离心机：大于5000r/min。
4.5 溶剂过滤器。
5 测定步骤
5.1 试样处理
5.1.1 液体样品
称取化妆品试样约1g(精确到0.001g)，置于50mL具塞锥形瓶中，加入15mL水，在超声波清洗器中超声提取20min，提取液移入25mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，经滤膜(3.12)过滤，所得滤
液供液相色谱测定
5.1.2 固体样品
称取化妆品试样约1g（精确到0.001g），置于50mL具塞锥形瓶中，加入15mL水，3g氯化钠固体，在超声波清洗器中超声提取20min，提取液过滤，用水定容至25mL，经滤膜（3.12）过滤，所得滤液供液相色谱测定。
2 测定
5.2.1 色谱条件
a）色谱柱： Kromasil c18 250mm×4.6mm（内径），5μm（粒径），或相当者；
b）流动相A：甲醇；
c）流动相B：0.005mol/L乙酸铵；
d）流动相梯度（见表1）；
e）流速：1.0mL/min；
f）检测波长：樱桃红、食品红17、柠檬黄、桔黄、苋菜红、胭脂红、靛蓝：254nm；亮蓝：63nm；
g）柱温：室温；
h）进样量：10μL。
5.2.2 标准工作曲线绘制
用水溶性色素标准储备液（3.11）分别配制成浓度为0.5mg/L、1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L的混合标准工作溶液，分别取10μL注入液相色谱仪，按色谱条件（5.2.1）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。在上述仪器条件下（5.2.1）柠檬黄的保留时间约为4.4min，苋菜红的保留时间约为5.lmi，靛蓝的保留时间约为5.9min，胭脂红的保留时间约为6.2min，桔黄的保留时间约为6.6min，食品红17的保留时间约为6.9min，亮蓝的保留时间约为7.3min，樱桃红的保留时间约为8.4min，水溶性色素标准物种类表和色谱图参见附录A、附录B。
5.2.3 试样测定
用微量进样器准确吸取10μL试样溶液（5.1）注入液相色谱仪，按色谱条件（5.2.1）进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积。待测物质含量髙，样液超过线性范围的，可用水稀释后进行测定。需要时，用液相色谱-质谱法进行确证（参见附录C）
5.3 空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。
6 结果计算
结果按式（1）计算：
X=（c×V）/m*1000 （1）
式中：
X——化妆品中待测物质的量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c——从标准工作曲线上查出的试样溶液中水溶性色素的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——试样定容体积，单位为升（L）；
m——试样的质量，单位为克（g）。
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