1.范围
本标准规定了食品中霉菌和酵母( moulds and yeasts)的计数方法。
本标准**法适用于各类食品中霉菌和酵母的计数,第二法适用于番茄酱罐头、番茄汁中霉菌的计数。
2.设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下：
2.1 培养箱:28℃±1℃。
2.2 拍击式均质器及均质袋。
2.3 电子天平:感量0.1g。
2.4 无菌锥形瓶:容量500mL。
2.5 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。
2.6 无菌试管:18mm×180mm。
2.7 旋涡混合器。
2.8 无菌平皿:直径90mm。
2.9 恒温水浴箱:46℃±1℃。
2.10 显微镜:10倍～100倍。
2.11 微量移液器及枪头:1.0mL。
2.12 折光仪。
2.13 郝氏计测玻片:具有标准计测室的特制玻片。
2.14 盖玻片。
2.15 测微器:具标准刻度的玻片。
3.培养基和试剂
3.1 生理盐水:见A.1。
3.2 马铃薯葡萄糖琼脂:见A.2。
3.3 孟加拉红琼脂:见A.3。
3.4 磷酸盐缓冲液:见A.4。
**法 霉菌和酵母平板计数法
4.检验程序
霉菌和酵母平板计数法的检验程序见图1
5.操作步骤
5.1 样品的稀释
5.1.1 固体和半固体样品:称取25g样品,加入225mL无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液),充分振摇,或用拍击式均质器拍打1min～2min,制成1:10的样品匀液。
5.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液)的适宜容器内(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或无菌均质袋中,充分振摇或用拍击式均质器拍打1min～2min,制成1:10的样品匀液。
5.1.3 取1mL 1:10样品匀液注入含有9mL无菌稀释液的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,或在旋涡混合器上混匀,此液为1:100的样品匀液。
5.1.4 按5.1.3操作,制备10倍递增系列稀释样品匀液。每递増增稀释一次,换用1支1mL无菌吸管。
5.1.5 根据对样品污染状况的估计,选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mI无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。
5.1.6 及时将20mL～25mL冷却至46℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。置水平台面待培养基完全凝固。
5.2 培养
琼脂凝固后,正置平板,置28℃±1℃培养箱中培养,观察并记录培养至第5d的结果。
5.3 菌落计数
用肉眼观察,必要时可用放大镜或低倍镜,记录稀释倍数和相应的霉菌和酵母菌落数。以菌落形成单位( colony- forming units,CFU)表示。
选取菌落数在10CFU～150CFU的平板,根据菌落形态分别计数霉菌和酵母。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延。
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