1.范围
本标准规定了食品中沙门氏菌( Salmonella)的检验方法。
本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。
2.设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下：
2.1 冰箱:2℃～5℃
2.2 恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃C。
2.3 均质器。
2.4 振荡器。
2.5 电子天平:感量0.1g。
2.6 无菌锥形瓶:容量500mL,250mL。
2.7 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。
2.8 无菌培养皿:直径60mm,90mm。
2.9 无菌试管:3mm×50mm、10mm×75mm。
2.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.11 全自动微生物生化鉴定系统。
2.12 无菌毛细管。
3.培养基和试剂
3.1 缓冲蛋白胨水(BPW):见A.1。
3.2 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液:见A.2。
3.3 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液:见A.3。
3.4 亚硫酸铋(BS)琼脂:见A.4。
3.5 HE琼脂:见A.5。
3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂:见A.6。
3.7 沙门氏菌属显色培养基。
3.8 三糖铁(TSI琼脂:见A.7。
3.9 蛋白胨水、靛基质试剂:见A.8。
3.10 尿素琼脂(pH7.2):见A.9。
3.11 氰化钾(KCN)培养基:见A.10。
3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基:见A.1l。
3.13 糖发酵管:见A.12。
3.14 邻硝基酚βD半乳糖苷(ONPG)培养基:见A.13。
3.15 半固体琼脂:见A.14。
3.16 丙二酸钠培养基:见A.15。
3.17 沙门氏菌O、H和Vi诊断血清。
3.18 生化鉴定试剂盒。
4.检验程序
沙门氏菌检验程序见图1。
5.操作步骤
5.1 预增菌
无菌操作称取25g(mL)样品,置于盛有225 mL BPW的无菌均质杯或合适容器内,以8000/min～10000r/min均质1min～2min,或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打lmin~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需调整pH,用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶或其他合适容器内(如均质杯本身具有无孔盖,可不转移样品),如使用均质袋,可直接进行培养,于36℃±1℃培养8h～18h。
如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃～5℃不超过18h解冻。
5.2 增菌
轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于10 mL TtB内,于42℃±1℃培养18h～24h。同时,另取1mL,转种于10mLSC内,于36℃±1℃培养18h～24h。
5.3 分离
分别用直径3mm的接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板(或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板),于36℃±1℃分别培养40h~48h(BS琼脂平板)或18h～24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板),观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。
5.4 生化试验
5.4.1 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺;接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,于36℃±1℃培养18h～24h,必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内,沙门氏菌属的反应结果见表2。
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