狂犬病毒检测病毒分离操作，是将狂犬病抗原检测或核酸检测阳性标本可以进一步进行病毒分离以便进行更深入的研究。分离方法如下：
细胞培养法分离病毒：将唾液、脑脊液、皮肤或脑组织标本研磨后，用 PBS 或 MEM 制成 30%悬液→4℃ 2000r/min 离心 20 分钟→取上清接种在 96 孔或 24 孔培养板内已形成单层的敏感细胞(鼠神经传代细胞、Vero 细胞或 BHK21 细 胞)上,吸附 2 小时后补加含 2%血清的维持液，37℃ 5%C02 孵育约 4～5 天， 丙酮固定感染后的细胞，用抗狂犬病毒单克隆抗体观察特异性荧光包涵体判断 结果。
阳性时吸取上清至一无菌容器内-70℃保存备用或继续传代。病毒通过细 胞的多次传代可以适应细胞培养并得到扩增。
乳小白鼠接种法分离病毒：30%的病人或动物脑组织悬液，离心取上清，接种 1～2 日龄乳鼠脑内，每个样品注射一窝乳鼠;注射后的乳鼠应在具有高效滤过 装置的负压饲养柜内饲养。症状不典型时可于接种**代后取脑继续传代，连续传代后潜伏期逐渐规律，一般为 5天左右。
发病乳鼠若确定为狂犬病毒感染,无菌取脑，-70℃或用含 50%甘油的 PBS -20℃保存，也可研磨后加灭菌脱脂牛 144 奶制成 20%悬液，真空冷冻干燥，长期保存。未发病存活的鼠保留至 21 天后 杀死作免疫荧光检测
