粗甘油是生产生物柴油的主要副产品，常作为抗冻剂、增塑剂、洗涤剂、防腐剂和乳化剂的合成原料，也可应用于食品、化妆品和制药等行业。从粗甘油中可以提取甾醇，植物甾醇在临床医学上具有降低胆固醇、消炎、退热、抗溃疡、抗肿瘤作用，在化妆品、动物生长剂、植物生长激素及化工和纺织等领域都有广泛的应用。在生物柴油制备反应中，一般用甲醇作溶剂，将碱性催化剂溶解在甲醇中，所以生物柴油副产物粗甘油中含有未反应完全的甲醇，这也是粗甘油中甲醇的*主要来源。在由粗甘油制备精甘油的过程中，粗甘油中所含的甲醇会释放到环境中，对人体健康造成损害如可使人体的中枢神经系统麻醉，并能使人体发生严重代谢性中毒;另外，甲醇溶入生产废水中会对环境产生危害。因此建立原料粗甘油中甲醇的快速、准确检测方法，对规范进口粗甘油的品质、保障相关生产企业工人的身体健康
及减少环境污染具有重要意义。
甲醇的检测方法主要有分光光度法和气相色谱法[6–7]。笔者建立了1，2-萘醌-4-磺酸钠分光光度法测定进口粗甘油中甲醇的方法，在pH13.00的KCl–NaOH缓冲溶液中，甲醇作为催化剂，能够催化氢氧根离子与1，2-萘醌-4-磺酸钠反应，形成橙红色的2-羟基-1，4-萘醌[8–9]，可用以直接测定甲醇含量。该法具有操作简便、灵敏度高等特点。
1实验部分
1.1主要仪器与试剂
往复式水浴恒温振荡器：HWT–10C型，天津恒奥公司;紫外可见分光光度计：Evolution300型，美国赛默飞世尔公司;分析天平：TP–214型，美国Denver公司;pH酸度计：UB–7型，美国Denver公司;超纯水系统：SyneryUV型，美国Millipore公司;甲醇标准溶液：纯度不低于99.9%，美国Chemservice公司;1，2-萘醌-4-磺酸钠：纯度不低于99.7%，日本TokyoKasei公司;氯化钾：分析纯，北京化工厂;氢氧化钠：分析纯，广州化学试剂厂;1，2-萘醌-4-磺酸钠溶液：0.005mol/L，准确称取0.1301g1，2-萘醌-4-磺酸钠于25mL烧杯中，加适量蒸馏水超声溶解后转移到100mL容量瓶中，定容至刻度，现配现用;氢氧化钠–氯化钾缓冲溶液：称取1.32g氢氧化钠和0.75g氯化钾于50mL烧杯中，充分溶解后，转移到250mL容量瓶中，定容至刻度，并用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调节至pH值13.00;甲醇标准储备溶液：10g/100mL，准确称取10.0235g甲醇标准溶液于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，4℃冰箱中保存，实验时取适量上述溶液稀释至所需浓度。
1.2实验方法
(1)标准工作曲线绘制。
利用甲醇标准储备溶液配制浓度分别为0，0.04，0.20，0.40，0.80，2.0g/L系列甲醇标准溶液，移取上述系列标准溶液分别于25mL比色管中，依次加入5.0mLKCl–NaOH缓冲溶液、6mL5.0×10–3mol/L1，2-萘醌-4-磺酸钠溶液，用水稀释至标线，摇匀，常温下放置30min后，以不加甲醇的试剂空白为参比，于454nm处测其吸光度。
(2)样品处理及测定。
准确称取粗甘油样品5.0～10.0g(根据粗甘油中甲醇含量而定)于蒸馏瓶中，加入100mL超纯水和2g氯化钠，在沸水浴中蒸馏，收集蒸馏液于50mL容量瓶中作为样液，冷却至室温，用水稀释至标线。取上述样液10mL于25mL比色管中，依次加入5.0mLKCl–NaOH缓冲溶液，6mL5.0×10–3mol/L1，2-萘醌-4-磺酸钠溶液，用水稀释至标线，摇匀，常温下放置30min后，以试剂空白为参比，于454nm处测其吸光度，根据吸光度的大小，利用标准工作曲线求出待测液中甲醇的含量，并根据取样量及稀释倍数计算粗甘油中甲醇的含量。
2结果与讨论
2.1吸收曲线
准确移取1.25mL甲醇标准储备液于25mL比色管中，依次加入NaOH–KCl缓冲溶液5.0mL，0.005mol/L1，2-萘醌-4-磺酸钠溶液6mL，用水稀释至25mL，摇匀，室温下放置30min。以试剂空白为参比，在330～700nm波长之间进行全扫描，以确定反应产物的*大吸收波长，结果见图1。由图1可见，*大吸收波长位于454nm，因此选择*佳分
析波长为454nm
2.2溶液的pH值
溶液pH值对甲醇催化反应形成产物的影响见图2。
由图2可见，当pH值为0～12.00时，溶液的吸光度很小。根据文献[10]，甲醇的电离常数pKa为15.5，pH值较高时，在强碱性溶液中的甲醇能部分电离形成CH3O–，它可以催化1，2-萘醌-4-磺酸钠和氢氧根离子发生作用，形成对可见光有较强吸收的2-羟基-1，4-萘醌，从而使吸光度增大。在较高的酸度条件下，甲醇分子难以电离出CH3O–，大大降低了它催化1，2-萘醌-4-磺酸钠和氢氧根离子发生作用的能力。当pH值为13.00～14.00时，甲醇能部分电离形成CH3O–，加快催化1，2-萘醌-4-磺酸钠和氢氧根离子发生作用，形成2-羟基-1，4-萘醌，从而使吸光度增大，因此选择溶液的pH值为13.00。
2.3显色剂和缓冲溶液的用量
选择一定浓度的甲醇标准溶液，以对应实际空白为参比，分别考察了5.0×10–3mol/L1，2-萘醌-4-磺酸钠溶液用量为4.0～8.0mL、缓冲溶液用量为2～6mL时对测定甲醇的影响。结果显示，当显色剂的用量分别为4.0，5.0，6.0，7.0，8.0mL时，吸光度分别为0.234，0.295，0.325，0.327，0.321;当缓冲溶液用量分别为2，3，4，5，6mL时，吸光度分别为0.085，0.148，0.286，0.319，0.317。由此可见，随着1，2-萘醌-4-磺酸钠溶液和缓冲溶液加入量的增加，吸光度逐渐增大。当1，2-萘醌-4-磺酸钠溶液和缓冲溶液的用量分别为6.0，1.5mL时，吸光度达到*大且比较稳定。因此选择显色剂和缓冲溶液用量分别为6.0mL和5mL。
2.4稳定时间
由于1，2-萘醌-4-磺酸钠在甲醇的催化下与OH–反应生成2-羟基-1，4-萘醌需要一定时间，所以反应产物的吸光度稳定性与时间有关。选择合适的甲醇标准溶液浓度按照1.2(2)进行试验，考察产物的稳定时间与吸光度之的关系。实验结果表明，从反应开始，随着放置时间的增加，反应体系的吸光度不断增大，当放置时间达到30min时吸光度达到*大且趋于稳定，本实验选择稳定时间为30min。
2.5干扰试验
用ICP–AES检测多批从不同国家进口的粗甘油中金属的含量，发现基本以Na+和K+为主，Na+的浓度在2000～8000mg/L之间，K+的浓度在4000～16000mg/L之间;另外还有少量的Fe3+，Mg2+，Cu2+和Ca2+等金属离子。考察了进口粗甘油中存在的常见离子对甲醇测定的干扰，控制测试结果的相对误差在±5%以内，当甲醇的浓度为1.0mg/mL时，800mg/L的Na+，K+，NO3–，C1–，SO42–;50mg/L的Mg2+;16mg/L的Cu2+不影响测定结果。实验采用蒸馏法将粗甘油中甲醇蒸馏出来，甲醇与粗甘油中的杂质能有效分离，所以粗甘油中的金属离子及其它杂质基本不干扰甲醇的测定。
2.6标准曲线、检出限和精密度
分别准确移取甲醇标准储备液0.1，0.5，1.0，2.0，5.0mL于25mL比色管中，依次加入NaOH–KCl缓冲溶液5mL，0.005mol/L1，2-萘醌-4-磺酸钠溶液6.0mL，用水稀释至25mL，摇匀，室温下放置30min。以试剂空白为参比，在454nm下测其吸光度，每个浓度平行测定5次。以吸光度为纵坐标，甲醇的浓度为横坐标绘制标准工作曲线。实验结果表明，甲醇浓度c在0.040～2.0g/L范围内与吸光度A呈良好的线性关系，线性回归方程为A=0.0526+0.5021c，r=0.9993。平行测定11份空白溶液，计算测定结果的标准偏差，按10倍标准偏差计算，再乘以样品的稀释倍数，得到方法的检出限为0.025mg/mL。连续测定甲醇含量不同的3份粗甘油样品各7次，测定结果的相对标准偏差为2.8%～4.6%。
2.7样品测定及回收率试验
分别取不同国家进口的粗甘油样品，精密称定后置于蒸馏瓶中，精密加入不同量的甲醇，按照选定实验条件测定甲醇含量并进行加标回收试验，结果见表1。由表1可知，回收率为93.4%～104.5%。
