1范围
本标准规定了用气相色谱法检验乳及乳制品中植物油的方法。
本标准适用于乳及乳制品中植物油的定性检验。
2.规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)
3.原理
样品经过氢氧化钾乙醇溶液皂化,用乙醚、石油醚萃取脂肪,通过蒸馏或蒸发去除溶剂,用正己烷萃取游离的甾醇,用气相色谱分析。若所测样品中含有β-谷甾醇,则确定其中含有植物油成分。
4.试剂与材料
所有的试剂如未注明规格,均为分析纯;实验用水如未注明,均应符合GB/T 6682的规定。
4.1 正己烷(C5H6):色谱纯。
4.2 乙醇(C2H5OH):95%。
4.3 乙醚[(C2H5)2O]。
4.4 石油醚:沸程为30℃～60℃。
4.5 无水硫酸钠(Na2SO4)。
4.6 氢氧化钾溶液:500g/L。
称取500g氢氧化钾(KOH),溶解后转移至1000mL容量瓶中,定容,混匀。
4.7 胆固醇和β-谷甾醇混和标准溶液:每毫升含各单组分甾醇为0.4mg。
分别精确称取胆固醇和β-谷甾醇标准品10mg,用正己烷(4.1)溶解并定容到同一25mL容量瓶中。摇匀后,冷藏于冰箱中,有效期60d。
5.仪器和设备
实验室常用仪器及以下各项。
5.1 气相色谱仪:配备氢火焰离子化检测器(FID)。
5.2 分析天平(感量0.01g)。
5.3 分析天平(感量0.1mg)。
5.4 旋转蒸发器。
5.5 磨口锥形瓶:250mL,可以连接空气冷凝管。
6.试样制备
6.1 液态试样
称量20g样品,精确至0.01g,置于磨口锥形瓶(5.5)中。
6.2 固态试样
称量1g～5g样品,精确至0.01g,置于磨口锥形瓶(5.5)中,加入50℃温水10mL溶解。
注:根据样品中的脂肪含量调整称取样量,使试样中脂肪含量不低于1g。
7.分析步骤
7.1 试液制备
上述盛有试样(第6章)的磨口锥形瓶(5.5)中,加入25mL氢氧化钾溶液(4.6)及25mL乙醇(4.2),摇匀,加入4粒～5粒玻璃珠,装上冷凝管,85℃水浴回流皂化45min。皂化液冷却至室温后,转入250mL分液漏斗中,用少量水洗锥形瓶(5.5),洗液并入皂化液中。
分液漏斗中加入25mL乙醚(4.3)和25mL石油醚(4.4),轻轻振摇约1min,静止分层。水相再用25mL乙醚(4.3)分别萃取两次,合并萃取液。多次用25mL水洗萃取液至pH为中性,经无水硫酸钠(4.5)脱水,过滤,收集滤液于蒸馏瓶中。40℃左右,用旋转蒸发器(5.4)将萃取液蒸至近干,用正己烷(4.1)溶解残渣,转移定容至10mL,用于气相色谱仪(5.1)测定。
7.2 气相色谱參考条件
气相色谱柱:DB-5毛细管柱,30m×0.25mm×0.25μm;
检测器温度:325℃;
进样口温度:280℃;
柱温:程序升温,自200℃起,以15℃/min升温至300℃,保持20min;
氮气流速:1.0mL/min;
氢气流速:30mL/min;
空气流速:300mL/min;
分流比:5:1;
进样量:2μL。
7.3 测定
准确吸取2μL胆固醇和β-谷甾醇的混合标准工作液(4.7),注入气相色谱仪(5.1)。在上述色谱条件下,出峰顺序依次为胆固醇和β-谷甾醇,标准溶液的气相色谱图参见图A.1。
准确吸取不少于两份的2μL试液(7.1),分别注入气相色谱仪(5.1)。
8.结果表述
胆固醇为动物脂肪的特征组分。若色谱图中出现β-谷甾醇色谱峰,则表明所测试样中含有植物油成分。
9.灵敏度
样品中脂肪的胆固醇检出限为0.5mg/kg,β-谷甾醇的检出限为1mg/kg。
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