1.范围
本标准规定了婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定方法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定。
2.规范性引用文件
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。
**法 0PA柱后衍生法
3.原理
样品用偏磷酸溶液溶解,经超声波振荡提取、离心、微孔滤膜过滤后,通过钠离子色谱柱分离,与邻苯二甲醛(OPA)衍生反应,用荧光检测器进行检测,外标法定量。
4.试剂和材料
除非另有规定,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 偏磷酸(HPO3)。
4.2 柠檬酸三钠(Na3C6H7O7·2H2O)。
4.3 苯酚(C6H6O)。
4.4 硝酸(HNO3)。
4.5 甲醇(CH3OH):色谱纯。
4.6 硼酸(H3BO3)。
4.7 氢氧化钾(KOH)
4.8 邻苯二甲醛(C8H6O2)(OPA)。
4.9 2-巯基乙醇(C2H6OS)。
4.10 聚氧乙烯月桂酸醚(Brij-35)。
4.11 牛磺酸标准品:纯度≥99%。
4.12 偏磷酸溶液(10g/L):称取10.0g偏磷酸(4.1),用水溶解并定容至1000mL。
4.13 柠檬酸缓冲液:称取19.6g柠檬酸三钠(4.2),加950mL水溶解,加1m1苯酚(4.3),用硝酸(4.4)调pH值至3.10～3.25,经0.45μm微孔滤膜过滤。
4.14 柱后荧光衍生溶剂(邻苯二甲醛溶液)。
4.14.1 硼酸钾溶液(0.5mol/L):称取30.9g硼酸(4.6),26.3g氢氧化钾(4.7),用水溶解并定容至1000mL。
4.14.2 邻苯二甲醛衍生溶液:称取0.60g邻苯二甲醛(4.8),用10mL甲醇(4.5)溶解后,加入0.5mL2-巯基乙醇(4.9)和0.35g Brij-35(4.10),用0.5mol/L的硼酸钾溶液(4.14.1)定容至1000mL,经0.45μm微孔滤膜过滤。临用前配制。
4.15 牛磺酸标准溶液
4.15.1 牛磺酸标准储备溶液(1mg/mL):准确称取0.1000g牛磺酸标准品(4.11),用水溶解并定容至100mL。储备液在4℃下可保存7天。
4.15.2 牛磺酸标准工作液:将牛磺酸标准储备液(4.15.1)用水稀释制备一系列标准溶液,标准系列浓度为:0、5、10、15、20μg/mL。临用前配制。
5.仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪,带有荧光检测器。
5.2 柱后反应器。
5.3 荧光衍生溶剂输液泵。
5.4 超声波振荡器。
5.5 pH计:精度为0.01。
5.6 离心机:转速≥5000转/分钟。
5.7 0.45μm微孔滤膜。
5.8 天平:感量为1mg,0.1mg。
6.分析步骤
6.1 试样的处理
准确称取固体样品1g～5g试样,液体样品5g～20g(精确至0.01g,试样中含牛磺酸5μg以上),加30mL偏磷酸溶液(4.12)溶解,充分摇匀,移入100mL容量瓶中;放入超声波振荡器中振荡10min～15min,取出冷却至室温后,用水定容至刻度;样液在5000转/分钟条件下离心10min,取上清液经0.45μm微孔膜(5.7)过滤,接取中间滤液以备进样。
6.2 测定
6.2.1 参考色谱条件
色谱柱:钠离子氨基酸分析专用柱(250mm×4.6mm)或同等性能的色谱柱。
流动相:柠檬酸缓冲液(4.13)。
流动相流速:0.30mL/min。
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