1 范围
本标准规定了液体乳中青霉噻唑酸钾的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于液体乳中青霉噻唑酸钾的测定。
本标准的方法检出限：10.0μg/kg。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样中的青霉噻唑酸钾在去除蛋白、脂肪处理后，经高效液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定性定量。
4 试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。
4.1 甲醇：色谱纯
4.2 磷酸二氢钠。
4.3 磷酸二氢钠溶液(pH=4.5)：
4.4 无水乙醇。
4.5 青霉素V钾标准品：纯度≥99‰。
4.6 青霉噻唑酸钾标准储备液(1mg加L)：准确称取0.1000g青霉素Ⅴ钾置于100mL容量瓶中，加入1mL青霉素酶，室温放置2h后用水定容，摇匀备用。
4.7 青霉素噻唑酸钾标准冮工作溶液：根据需要吸取适量青霉噻唑酸钾标准储备液，用空白样品稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液。
5 仪器
5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器(UV)。
5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。
5.3 低温高速离心机。
5.4 水相微孔滤膜：0.45μm。
6 测定步骤
6.1 试样溶液的制备
准确称取25g(精确到0.01g)牛乳于50mL离心管中，4000r/min低温(4℃)离心10min；去除上层脂肪层；再加入25mL无水乙醇，20000rmin低温(4℃)离心10min，取上清液定容至50mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，待高效液相色谱分析。
6.2 液相色谱条件
检测波长：230nm。
色谱柱：ODS C 18 5μm，250mm×2.1mm或相当者。
流动相：磷酸二氢钠溶液：甲醇=50：50。
流速：1mL/min。
柱温：30℃。
进样量：20μL。
6.3 测定
用青霉噻唑酸钾标准储备溶液配成的基质标准溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中青霉噻唑酸钾的响应值均应在仪器测定的线性范围内。
7 结果计算
从标准工作曲线上得到试样中相应的青霉噻唑酸钾浓度后，结果按公式(1)计算：
式中：
X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(μg/kg)。
C——从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)。
V——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)。
m——试样质量，单位为克(g)。
F——稀释倍数。
8 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的**差值不得超过算术平均值的10%。
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