技术原理:
将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得Ct值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
概述
实时荧光定量PCR(RealTimePCR)技术,是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量,*后通过标准曲Chemicalbook线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR的荧光检出方法包括SYBRgreen(荧光染料掺入法)和Taqmanprobe(探针法)两种方法。
应用
从动物细胞、人或动物组织等样品中提取核酸;
对核酸进行浓度及纯度分析;
荧光定量PCR检测;
(1)引物和探针的设计与合成;
(2)**定量和相对定量的选择;
(3)探针法和染料法的选择;
(4)荧光定量PCR仪对目的基因的检测;Chemicalbook
(5)数据统计和分析;
预实验服务:根据客户提供的目的基因序列或NCBI序列号提供客户引物和探针,并筛选出*优化的引物和探针;
正式实验服务:根据预实验筛选的引物和探针对所用样品进行荧光定量PCR的检测,并对结果进行统计和分析。