毒株是从穿山甲体内分离出来的一种新的冠状病毒,命名为 GX_P2V,与新型冠状病毒 2019-nCov 蛋白有 92.2%的同源性,氨基酸序列有 90%的同源行,适用于筛选新型冠状病毒药物的替代模型。它与新型冠状病毒 2019-nCov 的亲缘关系优于 SARS 病毒非典。部分药物(例如千金藤素、甲氟喹、塞拉菌素等)经与新冠病毒的筛选模型比对,确认了两种模型的结果一致。
病毒的同源性包括基因组核苷酸序列的同源,也包括蛋白质氨基酸序列的同源。在序列比对方面,穿山甲冠状病毒与新冠病毒在氨基酸序列同源性方面超过 90%的相似度。对于药物筛选来说,蛋白质氨基酸序列的同源性越高,意味着病毒生命活动的方式越相近,可以形象地理解为,两个病毒的“行为方式”非常一致。以低致命性、高同源的冠状病毒 GX_P2V 建立的药筛平台,可以进行抗新冠病毒有效药物的筛选。
验证“替代”的可行性,验证冠状病毒 GX_P2V 进入细胞是否与新冠病毒使用同一病毒通道——“Vero E6 细胞是通用的病毒感染用细胞,ACE2 是新冠病毒进入细胞的蛋白受体,我们使用小干扰 RNA(siRNA)介导的技术,使得感染用细胞上的 ACE2 沉默,看看 GX_P2V 是不是也以 ACE2 作为细胞受体。结果表明,GX_P2V 使用的细胞受体与新冠状病毒的细胞受体一致。
通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)也可以实时测定在细胞体系中病毒 RNA 的浓度,如果抑制效果好那么病毒 RNA 的浓度就低。千金藤素处理后病毒浓度比未经处理组低 15393 倍。
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