1.范围
GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中苯酚残留量液相色谱测定方法。
本部分适用于蜂蜜中苯酚残留量的测定。
本部分苯酚的方法检出限为0.025mg/kg。
2.规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T 18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容或修订版均不适用于本部分,然而,鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本适用于本部分。
GB/T 6379-1986 测试方法的精密度 通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性(neq ISO 5725:1981)
GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法(neq ISO 3696:1987)
3.原理
试样中所含的苯酚使用磷酸蒸出,用苯和氢氧化钠溶液萃取后,经C18固相萃取柱净化。用配有紫外检测器高效液相色谱仪测定,外标法定量。
4.试剂和材料
除另有说明外,所用试剂均为优级纯,水为GB/T 6682—1992规定的一级水。
4.1 甲醇:一级色谱纯。
4.2 苯:一级色谱纯并经过提纯。取200mL苯以2×150mL0.1mo/L氢氧化钠溶液提取两次。
4.3 乙腈:一级色谱纯。
4.4 磷酸。
4.5 氯化钠。
4.6 氢氧化钠。
4.7 碳酸氢钠。
4.8 磷酸溶液(1+9):取10mL磷酸(4.4)加水稀释至100mL。
4.9 氢氧化钠溶液:0.1mol/L。称取20g氢氧化钠(4.6)加水溶解,稀释至500mL。
4.10 碳酸氢钠溶液:10g/L。称取1.0g碳酸氢钠(4.7)加水溶解,稀释至100mL。
4.11 碳酸氢钠溶液:50g/L。称取5.0g碳酸氢钠加水溶解,稀释至100mL。
4.12 甲醇十水(1+1)。
4.13 苯酚标准物质:纯度≥99%。
4.14 苯酚标准储备溶液:准确称取适量的苯酚标准物质(4.13),用甲醇(4.1)配制成浓度为0.10mg/mL标准储备液。
4.15 苯酚标准工作溶液·根据需要用甲醇溶液(4.12)稀释成适当浓度的标准工作溶液。
4.16 C18固相萃取柱:使用前分别用3mL甲醇及6mL水洗涤,使之保持湿润。选用不同批次的C18固相萃取柱时,需作洗脱条件试验。
5.仪器
5.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器。
5.2 振荡器。
5.3 空气泵。
5.4 玻璃蒸馏装置:配有500mL平底蒸馏烧瓶及加热装置。
5.5 微量注射器100μL。
6.试样制备与保存
6.1 试样的制备
对无结晶的实验室样品,将其搅拌均匀。对有结晶的样品,在密闭情况下,置于不超过60℃的水浴中温热,振荡,待样品全部融化后搅匀,迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中,密封,并标明标记。
6.2 试样的保存
将试样于常温下保存。
7.分析步骤
7.1 蒸馏
称取20g试样,精确到0.01g,置于500mL平底烧瓶中,加入90mL水,使试样完全溶解。然后依次加入25g氯化钠(4.5),2mL磷酸溶液(4.8)和几个素瓷片。开始加热蒸馏,收集前30mL馏分。
7.2 净化
准确移取15mL馏分(7.1)于60mL分液漏斗中,加入5mL碳酸氢钠溶液(4.11),混匀后加入6g氯化钠,使之溶解。然后用2×5mL苯(4.2)提取两次,收集苯相。用3mL碳酸氢钠溶液(4.10)洗涤苯相,弃去水相。再分别用2×4mL氢氧化钠溶液(4.9)提取苯酚两次,收集氢氧化钠溶液,用磷酸(4.4)调节酸度至pH=3,加入2.5g氯化钠。
将上述溶液以约2.0mL/min的流速通过经预处理的C18固相萃取柱(4.16),待溶液全部流出后,用0.5mL水洗涤小柱,抽干5min,然后用0.5mL甲醇洗脱,收集洗脱液并用水定容至1mL,摇匀后,供液相色谱仪测定。
7.3测定
7.3.1 液相色谱条件
a) 色谱柱: Hypersil 5μm C18,150mm×4.6mm(内径)或相当者;
b) 流动相:乙腈十水(18+82);
c )流速10mL/min;
d) 检测波长:195nm;
e) 进样量.80μL。
7.3.2 液相色谱测定
根据试样测定液中苯酚含量情况,选定峰高相近的苯酚标准工作溶液。标准工作溶液和试样测定液中苯酚的响应值均应在仪器测定的线性范围内。对标准工作溶液和试样测定液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下,苯酚的参考保留时间为10.96min。
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