1 范围
本标准规定了辣椒素的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于辣椒及以其为原料生产食品中的辣椒素、二氢辣椒素含量的测定。
本方法的检出限辣椒素为0.13mg/kg，二氢辣椒素为0.04mg/kg。
本方法的线性范围辣椒素为0.10mg/L~160mg/L，二氢辣椒素为0.04mg/L~160mg/L。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样经甲醇四氢呋喃溶液提取，过微孔滤膜，进样，用反相色谱分离，荧光检测器检测，外标法定量。
4 试剂和材料
除非另有规定，仅使用色谱纯试剂，实验用水应符合GB/T 6682 一级水的要求。
4.1 甲醇(CH3OH)
4.2 四氢呋喃(C4H80)。
4.3 甲醇四氢呋喃溶液(1+1)：取200mL甲醇和200mL四氢呋喃混合均匀备用。
4.4 无水硫酸钠(NaSO4)，分析纯，用前400℃烘干30min，磨碎。
4.5 辣椒素标准品，纯度大于95%。
4.6 二氢辣椒素标准品，纯度大于90%。
4.7 辣椒素标准储备液称取0.0100g辣椒素标准品，用甲醇溶解，定容至50mL，辣椒素质量浓度为200mg/L。
4.8 二氢辣椒素标准储备液：称取0.0100g二氢辣椒素标准品，用甲醇溶解，定容至50mL，二氢辣椒素质量浓度为200mg/L。
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪：带荧光检测器。
5.2 天平：感量±0.001g、±0.01g
5.3 超声波提取器。
5.4 组织捣碎机。
5.5 电动磨碎机。
5.6 恒温水浴锅。
5.7 滤膜：0.45μm，有机相。
6 分析步骤
6.1 提取
6.1.1 辣椒粉、干辣椒及固态辣椒制品
将样品用电动磨碎机磨碎，称取0.2g精确到0.0001g，于100mL具塞锥形瓶中，加入25mL甲醇四氢呋喃溶液，在60℃水浴条件下，用超声波提取器提取30min，过滤，收集滤液。将滤渣连同滤纸重新用25mL甲醇四氢呋喃溶液经超声波提取器提取10min后，再重复一次。将三次过滤收集的滤液合并，在70℃~75℃恒温水浴下浓缩至30mL左右，转移至50mL容量瓶，用甲醇-四氢呋喃溶液定容。经0.45μm有机相滤膜过滤后进行色谱分析。根据试样中的辣椒素含量，必要时进行稀释，使试样中辣椒素含量在0.13mg/L~160mg/L之间，二氢辣椒素含量在0.04mg/L~160mg/L范围内。
6.1.2 鲱辣椒、辣椒酱及含水量较高的辣椒制品
将样品用组织捣碎机捣碎，称取10.00g样品于100mL具塞锥形瓶中，加人3.0g无水硫酸钠，25mL甲醇四氢呋喃溶液，震摇，用超声波提取器提取30min，过滤，收集滤液。以后同6.1.1“将滤渣连同滤纸重新…”操作。
6.1.3 辣椒油等油状制品
将样品用组织捣碎机均质，称取2.00g样品于100mL具塞锥形瓶中，加入25mL甲醇四氢呋喃溶液，用超声波提取器提取30min，过滤，收集滤液。以后同6.1.1“将滤渣连同滤纸重新…”操作。
6.2 色谱参考条件
色谱柱：C18 150mm×4.6mm，粒径5μm。
流动相：甲醇+水=80+20，用前过0.45m滤膜，脱气。
流速：0.6mL/min。
荧光检测器激发波长229nm，发射波长320mm。
进样量10μL。
6.3 标准曲线的绘制
将辣椒素、二氢辣椒素标准储备液分别用甲醇稀释成质量浓度为0.2mg/L1mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mgL和160mg/L系列标准工作溶液，按6.2色谱条件测定。以辣椒素、二氢辣椒素质量浓度为纵坐标，相应的峰面积积分值为横坐标，计算标准曲线或求线性回归方程。
6.4 试液的测定
将制备好的试液在6.2色谱条件下测定，做单点或多点校准，以峰面积积分值定量。
7 结果计算与表述
试样中辣椒素、二氢辣椒素含量以质量分数v计，单位以毫克每千克(mg/kg)表示，按公式(1)计算：
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