1.范围
本标准规定了采用膜过滤法测定入出境船舶压舱水中大肠菌群(coliforms)的程序和方法。
本标准适用于对入出境船舶压舱水中的大肠菌群进行计数。
2.设备和材料
2.1 恒温培养箱:36℃±1℃。
2.2 冰箱:2℃～8℃。
2.3 100mL量筒:灭菌。
2.4 膜过滤装置:见4.1.2。
2.5 无菌纤维素酯滤膜,白色,带格栅,直径47mm,孔径0.45μm。
2.6 无菌移液管:10mL,精确到0.1mL。
2.7 无菌生理盐水。
2.8 锥形瓶:150mL。
2.9 紫外线灯:波长366nm。
2.10 无菌培养皿:直径50mm。
2.11 无菌滤器:孔径0.22μm。
2.12 MI培养基:见附录A。
3.检测程序
大肠菌群检测程序见图1。
4.操作步骤
4.1 准备
4.1.1 制备MI琼脂培养基,4℃保存的培养基应待温度恢复至室温备用。
4.1.2 装配过滤装置:用消毒镊子夹取无菌滤膜置于滤器多孔盘上,格栅面向上,装配滤杯与滤器基座,连接缓冲瓶、真空泵(无真空泵可用注射器代替)。过滤装置示意见图2。
4.1.3 样品稀释:用无菌移液管移取10mL水样至盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶内,充分混匀,根据对样品污染状况的估计,按上述操作依次制成10倍系列等比稀释的样品匀液备检。每份样品选取3个适宜的连续稀释度分别进行检测。
4.2 抽滤
4.2.1 加30mL无菌水于滤杯中,充分浸湿滤膜。
4.2.2 用无菌量筒量取100mL水样或稀释液,倒入滤杯,开启真空泵,抽滤完100mL水样后分别用30mL无菌水冲洗滤杯两次。
4.2.3 关闭真空泵,移去滤杯,用消毒镊子轻轻夹取滤膜边缘,将滤膜格栅面向上覆于MI琼脂培养基上,用镊子轻压或滑动滤膜,使其贴紧培养基,防止滤膜边缘翘起或与琼脂之间形成气泡。
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