微生物指标是其评价产品卫生性能的必测项目之一。饲料中的微生物除了会降低饲料品质及饲用价值外，还可能产生一些毒副作用，严重影响食用动物的健康安全。由于国标GB 13078《饲料卫生标准》 中明确对部分饲料产品中的霉菌总数、细菌总数和沙门氏菌进行了限量规定。而且 2019年农业农村部发布的饲料质量安全监督抽查检测工作要求中特别规定了 “微生物指标不合格不予复核检测”，所以饲料微生物检验是饲料产品质量检测的*重要的一环。
一、饲料微生物检测项目
微生物污染物的检测项目主要有细菌总数、霉菌总数及沙门氏菌。
1.细菌总数
细菌总数一般通过菌落总数来表示, 即在 30℃的条件下培养 72h 后, 普通营养琼脂平板上出现细菌的菌落总数。 菌落总数代表饲料卫生质量的优劣。
2.霉菌
霉菌作为饲料对饲料安全造成危害的主要微生物类群, 其含量高低直接代表饲料对动物健康危害性的高低。
3.沙门氏菌
沙门氏菌容易引起动物伤寒、 副伤寒及急性胃炎的发生。
二、饲料微生物检测方法
1.琼脂平板培养法
琼脂平板法是多年来我国微生物检测的主要方法, 即在琼脂平板上培养后, 通过菌落情况来判断微生物含量, 这种方法通常需要 2——3d 才能完成, 费时、 费力而且复杂。
2.电阻电导测定法
细菌在生长繁殖过程中, 可以将培养液中蛋白质及糖类等大分子物质进行有效分解, 形成氨基酸及有机酸等小分子物质, 从而使培养液的导电度发生改变。 通过测量培养液电阻及导电度的变化, 即可以得到样品含菌量。
3.ATP 检验法
ATP 检验法就是将 ATP 检验仪与计算机相连后, 通过计算机将 ATP 检验仪的检验结果显示出来。 其检验原理为: 任何生命体种均含有 ATP, 通过荧光酶、 荧光物质或者氧及镁离子ATP 发出的光量与 ATP 含量成正比, 通过光量既可以得到饲料各种微生物的含量。
4.PCR 技术
PCR 技术主要通过对微生物 DNA 或者 RNA 片段进行扩增, 检测其扩增产物, 得到饲料中致病菌的含量。
5.基因探针法
基因探针能够对特异碱基序列中一段单链 DNA 或者 RNA分子进行识别。 标记后的基因探针与靶细胞杂交后, 通过对杂交产物进行检测即可得到微生物含量。
三、饲料微生物采样方案
我们检验饲料微生物指标时，采样前应根据检验目的、样品特点、批量、检验方法、微生物特性等确定采样方案。采样方案应包括但不限于采样目的、人员、人数、范围、地址以及样品的份数和采样量等。采样人员、样品的份数和采样量要根据检验目的、样品特点、批量、检验方法、微生物的特性等确定。
样品数量及份样数
样品量和份样数应根据GB/T14699.1要求执行，或根据检验目的和实际样品的特点确定。用于细菌总数、霉菌总数及益生菌检测的样品，每个样品的份样数不少于5个，对于需要检验沙门氏菌等致病菌的样品，份样数不少于8个。每份样品的总采样量应满足微生物指标检验的要求，一般固体样品不少于500g，液体样品不少于500mL。
采样步骤
1.采样应尽可能在洁净区进行，没有洁净条件的应尽可能选择少尘、非生产的区域。
2.采样必须遵循无菌操作原则。预先准备好的无菌采样工具（设备）和容器必须在采样时方可打开。非独立包装样品采样时应两人操作，一人负责采样，另一人负责打开盛放样品容器、密封和包装等。
3.应从未开封的包装内采样。确认样品的批号、生产日期、保质期等信息，确保包装无破损且在
保质期内。
4.每份样品的总采样量应满足微生物指标检验。
5.每采集一个样品，需要更换一次无菌手套、采样工具等。
四、不同形态样品采样注意事项
1.固体样品
1.1 独立包装小于或等于1000 g的， 可随机抽取一个完整包装或同一批*小零售包装； 独立包装大于1000 g的， 应用无菌采样钎、 采样铲或采样勺等从同一包装的不同部位（ 表层、 中间和底层） 分别采取不少于25 g样品， 放入同一个无菌采样容器内作为一份饲料样品， 直到检测前不要开封， 以防污染。
1.2 桶装或大包装固体样品， 应用无菌采样器由几个不同部位采取不少于25 g样品， 放入同一个灭菌容器内， 使之有充分的代表性。
1.3 冷冻样品应保持冷冻状态采样。
1.4 散装固体样品可用无菌采样铲、 采样勺或采样器采样； 固体粉末样品， 应边混合边采样。 每件样品的采样量应满足微生物指标检验单位的要求。
2.半固体样品
2.1 对以储罐运输和储存的产品， 可使用适当的、 能沿对角线插至罐底部的工具取样， 至少在3个深度采取份样, 如可能， 在储罐的整个截面采集份样。 采样后， 用部分该产品将采样孔封好。
2.2 如果不能混合， 也不能在产品的流动中采样， 则每隔30 cm采一个份样， 所采每个份样的量应与该特定深度处罐的横截面积成比例。
3.液体样品
3.1 独立包装小于或等于1000 mL的， 可随机采取一个完整包装或同一批多个完整包装； 独立包装大于1000 mL的， 应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体， 使其达到均质后采集适量样品， 放入同一个无菌采样容器内作为一份饲料样品。 直到检测前不要开封， 以防污染。
3.2 有活塞的瓶装液体在采样前， 应先用无菌棒搅拌均匀， 用75%酒精棉球将采样开口处周围擦拭消毒， 然后打开塞， 将内容物倒出一些后， 再用无菌工具采集样品。
3.3 桶装或大容器包装的液体样品在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体， 使其均匀。 采样时应先将采样管浸入液体内略加漂洗， 然后用洗耳球吸取所需量的样品。
3.4 散装液体样品通过振摇或搅拌混匀用无菌玻璃吸管采样，样品取出后， 将其装入无菌样品容器，在酒精棉球消毒后加盖密封。 每件样品的采样量应满足微生物指标检验单位的要求。
注： 样品容器里的装样量不得超过其总容量的四分之三， 便于检测前将样品摇匀。
4.流水线样品
4.1 根据样品传送的速度及采样量， 确定合适的采样频率。 用采样铲或自动采样器在流水线的某一截面采样。
