快速液相分析法检测化妆品中邻苯二甲酸酯类化合物

检测及试验方法

　　试剂

　　10种邻苯二甲酸酯类化合物包括邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二正丙酯(DPP)、邻苯二甲酸二正丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二正戊酯(DAP)、邻苯二甲酸二正己酯(DHP)、邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)、邻苯二甲酸二环己酯(DcHP)、邻苯二甲酸二正辛酯(DOP)和邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)，德国Dr.Ehren—storfer公司；甲醇(色谱纯)，美国Tedia公司；超纯水，美国Milli—Q。

　　实验方法

　　校准曲线的制备

　　混合标准储备溶液(p=1 000 mg／L)：分别称取10种邻苯二甲酸酯类化合物标准品0.05 g(精确到O.1 mg)，用甲醇溶解，移人50 mL容量瓶中，定容，摇匀，配成质量浓度为1 000 mg／L的混合标准溶液。

　　移取邻苯二甲酸酯类化合物标准储备溶液0、1.OO、2.00、4.OO、6.00、8.00 mL于10 mL具塞刻度管中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。此时溶液中各组分浓度分别为O、100、200、400、600和800 mg／L。在设定色谱条件下，分别取5“L进行HPLC分析。根据标准系列质量浓度和峰面积，绘制校准曲线。

　　样品处理

　　称取样品约1g(精确至1mg)于10 mL具塞刻度管中，加入甲醇至刻度，振摇，超声提取20 min，必要时高速离心。经0.45um滤膜过滤，滤液作为待测样液备用。

　　测定

　　按前述色谱条件操作，以保留时间定性，外标法定量。若样品中待测组分含量过高，应用甲醇稀释后测定。色谱图检出的物质，经与该物质的标准紫外光谱图比较确证后，根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。

　　色谱条件的选择

　　以常规液相色谱柱(TC-C18(2)，5um，4.6 mm×250 mm，安捷伦)为分析柱。以甲醇-水为流动相，按照国家食品药品监督管理局提供的《化妆品中邻苯二甲酸酯类化合物的检测方法》中的梯度洗脱条件，进样分析，结果如图1所示。整个分析过程需要30 min(25 min的色谱分离时间加5 min的色谱柱平衡时间)，与文献报道基本一致。采用快速分析色谱柱，整个分析过程缩短为9 min(7 min的色谱分离时间加2 min的色谱柱平衡时间)(见图2)，分析时间缩短了2／3，大大提高了工作效率，同时节省了有机溶剂。

　　方法的可操作性讨论

　　常规液相色谱仪是基层实验室普及率较高的一类分析仪器，常规的液相分析方法需要的分析时间比较长(一般在30 min左右)，有机溶剂消耗量也较大。采用亚2肛m颗粒填料的超高压液相色谱方法具有色谱柱效高、分析速度快等优点，同时也大大降低了溶剂消耗量。然而采用小粒径填料的色谱柱反压很高，需要提供足够的柱前压，超出常规液相色谱仪的承受范围(一般不超过20 MPa)，从而影响了快速分析检测的实现。

　　装填具有核壳结构的表面多孔颗粒填料的色谱柱，具有低反压和高柱效的特点，可以在常规液相色谱仪上实现快速分析检测。文献报道采用超高效液相色谱法分析四种邻苯二甲酸酯，分析时间为3 min，但需要专门的超高效液相色谱仪器。使用常规液相色谱柱(图1)，在整个分析过程中柱前压在12～24 MPa之间变化(流动相中有机溶剂含量的变化导致流动相黏度改变，进而导致柱前压随之变化)；而采用快速分析柱(图2)的柱前压在10～18 MPa之间变化(此条件下流动相中有机含量较高，在一定程度上降低了流动相的黏度)，常规液相色谱一般均可提供20 MPa的柱前压，因此该方法具有较强的可操作性，易于在基层实验室普及的常规液相色谱仪上实现快速分析检测。