方法原理:
薄膜过滤法
需要用品:
1.过滤系统:装有滤膜的部分需要高压灭菌(或滤膜安装后灭菌)。
微生物限度过滤系统
2、滤膜:滤膜进行孔径应不大于0.45μm,直径以及一般为50mm。
微生物限度检查过滤膜
3.培养基:玫瑰红钠培养基和营养琼脂培养基。
1、装上要检验的水样容器,取样吸管、钳子等用品要消毒,水点开放,让水流一段时间。快速将水样放入容器中。
图2。把这个送到微生物限度实验室。以下步骤应尽量在无菌的环境下进行。
3.**用缓冲液(PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液)以1:10(10毫升纯净水和90毫升缓冲液)稀释待测水样,然后用10毫升过滤和冲洗(使用50毫升缓冲液),冲洗量可按照验证方法进行,但不应过多。主要考虑的是避免损坏滤膜上的微生物。
4、 视情况可做2~3个梯度的稀释不同浓度数据进行信息过滤,并每种培养基做双份测试,做了以下三个发展梯度,每个功能梯度计算每种培养基已经做了两份,一个研究试样水就用掉了12张膜。
百检网提醒纯化水微生物限度(微量限度)实验有三个梯度原因,有一个例子(药物) : 一旦遇到一种情况,用1:10的试验溶液倒入平板,可能不是菌长,而1:100和1:1000却要长得多,这主要是因为样品药物具有抑菌作用,在1:10的条件下,抑菌性能仍然很高,但抑制了细菌的生长,但当1:100,1:1000稀释时,抑菌性能降低,有利于细菌的生长,这就是为什么实验需要先验证,而纯水的可能性很小,这可能是一个谨慎的做法。
6.过滤后,将集菌面朝上贴在培养基上,通过培养基对膜的渗透来支持细菌的生长,使其在膜上鼓胀生长,有利于计数。相反,细菌会渗入培养基中生长,变得模糊不清。
7、 营养琼脂培养基置于30-35摄氏度进行培养3天,玫瑰红钠在23-28摄氏度之间培养3-5天,每天工作记录以及细菌细胞生长发展情况。
8.统计该时间之后的菌落数,换算成每ML有多少菌落数。
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