1.范围
本标准规定了啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯含量的气相色谱-质谱法测定。
本标准适用于啤酒、葡萄酒、黄酒、白酒等酒类以及酱油中氨基甲酸乙酯含量的测定。
2.原理
试样加D5-氨基甲酸乙酯内标后,经过碱性硅藻土固相萃取柱净化、洗脱,洗脱液浓缩后,用气相色谱-质谱仪进行测定,内标法定量。
3.试剂和材料
注:除非另有说明,本标准所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的三级水。
3.1 试剂
3.1.1 无水硫酸钠(Na2SO4)。
3.1.2 氯化钠(NaCl)。
3.1.3 正己烷(C6H14):色谱纯。
3.1.4 乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。
3.1.5 乙醚(C4H10O):色谱纯。
3.1.6 甲醇(CH4O):色谱纯。
3.1.7 碱性硅藻土固相萃取柱:填料4000mg、柱容量12mL。
3.2 试剂配制
3.2.1 无水硫酸钠:450℃烘烤4h,冷却后贮存于干燥器中备用。
3.2.2 5%乙酸乙酯-乙醚溶液:取5mL乙酸乙酯,用乙醚稀释到100mL,混匀待用。
3.3 标准品
3.3.1 氨基甲酸乙酯标准品(C3H7O2N,CAS:51-79-6):纯度大于99.0%。
3.3.2 D5-氨基甲酸乙酯标准品(C3H2D5NO2,CAS:73962-07-9):纯度大于98.0%。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 D5-氨基甲酸乙酯储备液(1.00mg/mL):准确称取0.01g(精确到0.0001g）D5-氨基甲酸乙酯标准品,用甲醇溶解、定容至10mL,4℃以下保存。
3.4.2 D5-氨基甲酸乙酯使用液(2.00μg/mL):准确吸取D5-氨基甲酸乙酯储备液(1.00mg/mL)0.10mL,用甲醇定容至50mL,4℃以下保存。
3.4.3 氨基甲酸乙酯储备液(1.00mg/mL):准确称取0.05g(精确到0.0001g)氨基甲酸乙酯标准品,用甲醇溶解、定容至50mL,4℃以下保存,保存期3个月。
3.4.4 氨基甲酸乙酯中间液(10.0μg/mL):准确吸取氨基甲酸乙酯储备液(1.00mg/mL)1.00mL,用甲醇定容至100mL,4℃以下保存,保存期1个月。
3.4.5 氨基甲酸乙酯中间液(0.50μg/mL):准确吸取氨基甲酸乙酯中间液(10.0μg/mL)5.00mL,用甲醇定容至100mL,现配现用。
3.4.6 标准曲线工作溶液:分别准确吸取氨基甲酸乙酯中间液(0.50μg/mL)20.0μL、50.0μL、100.0μL、200.0μL、400.0μL和氨基甲酸乙酯标准中间液(10.0μg/mL)40.0μL、100.0μL于7个1mL容量瓶中,各加2.00μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液100μL,用甲醇定容至刻度,得到10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL、1000ng/mL的标准曲线工作溶液,现配现用。
4.仪器和设备
4.1 气相色谱-质谱仪,带电子轰击源(EI）源。
4.2 涡旋混匀器。
4.3 氮吹仪。
4.4 固相萃取装置,配真空泵。
4.5 超声波清洗机。
4.6 马弗炉。
4.7 天平:感量为0.1mg和1mg。
5.分析步骤
5.1 试样制备
样品摇匀,称取2g(精确至0.001g)样品(啤酒超声5min脱气后称量),加100.0μL、2.00μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液、氯化钠0.3g(若为酱油不加氯化钠),超声溶解、混匀后,加样到碱性硅藻土固相萃取柱上,在真空条件下,将样品溶液缓慢渗亼萃取柱中,并静置10min。经10mL正已烷淋洗后,用10mL5%乙酸乙酯-乙醚溶液以约lmL/min流速进行洗脱,洗脱液经装有2g无水硫酸钠的玻璃漏斗脱水后,收集于10mL刻度试管中,室温下用氮气缓缓吹至约0.5mL,用甲醇定容至1.00mL制成测定液,供GC/MS分析。
5.2 仪器参考条件
气相色谱-质谱仪分析参考条件:
--毛细管色谱柱: DB-INNOWAX,30m×0.25mm(内径)×0.25μm(膜厚)或相当色谱柱;
--进样口温度:220℃；
--柱温:初温50℃,保持1min,然后以8℃/min升至180℃,程序运行完成后,240℃后运行5min；
--载气:氦气,纯度≥99.999%,流速1mL/min;
--电离模式:电子轰击源(EI),能量为70eV;
--四级杆温度:150℃;
--离子源温度:230℃;
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