NY/T 1757-2009 饲料中苯骈二氮杂革类药物的测定 液相色谱-串联质谱法 检测标准

百检网 2021-11-15

1 范围

本标准规定了测定饲料中氯氮革、硝西泮、奥沙西泮、氯硝西泮、劳拉西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑和地西泮等9种苯骈二氮杂革类药物含量的液相色谱串联质谱法(LCMS/MS)。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料。

LC-MS/MS法定量限为0.03mg/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本适用于本标准。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 14699.1 饲料采样

GB/T 20195 动物饲料试样的制备

3 原理

在碱性条件下,用乙酸乙酯提取饲料中苯骈二氮杂革类药物,蒸干提取液用正已烷溶解残渣,经过硅酸镁固相萃取小柱富集、净化,LC-MS/MS分离测定。

4 试剂和材料

除非另有规定,仅使用确认为分析纯的试剂。

4.1 水,GB/T 6682,一级和三级。

4.2 甲醇:色谱纯。

4.3 乙腈:色谱纯。

4.4 甲酸:优级纯。

4.5 正己烷。

4.6 氯化钠。

4.7 乙酸乙酯。

4.8 碳酸钠饱和溶液:称取56g碳酸钠,加入100mL水(三级,4.1),搅拌、配制成饱和溶液。

4.9 0.05%甲酸溶液:准确移取5.00mL甲酸(4.4)于100mL容量瓶中,用水(一级)定容,用0.20μm膜过滤后,再准确移取10.00mL于1000mnL容量瓶中,用水(一级)定容、摇匀。用前超声5min。

4.10 洗脱液I:甲醇(4.2)+正已烷(4.5)+丙酮=45+45+10。

4.11 洗脱液Ⅱ:甲醇十水(一级)=70+30。

4.12 苯骈二氮杂革类药物混合贮备溶液(100μg/mL):分别准确称取9种苯骈二氮杂革类药物(氯氮革、硝西泮、奧沙西泮、氯硝西泮、劳拉西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑和地西泮)化学对照品(各种药物的纯度以****计)100mg(精确到0.1mg)于100nL容量瓶中,用甲醇溶解、定容,配制成浓度各为

100μg/mL 的苯骈二氮杂革类药物混合贮备溶液。置于4℃~8℃冰箱中保存,有效期为1个月。

4.13 苯骈二氮杂革类药物中间溶液(1.00μg/mL):准确移取苯骈二氮杂革类药物混合贮备溶液(4.12)l00mL于100mL容量瓶中,用甲醇稀释、定容。置于4℃~8℃冰箱中保存,有效期为1周。

4.14 苯骈二氮杂革类药物工作溶液:分别准确移取苯骈二氮杂革类药物中间溶液(4.13)50μL、100μL、200μL、300μL、500μL、750μL,用洗脱液Ⅱ(4.11)稀释至lmL配制成工作溶液,浓度分别为0.05ug/ml、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.30μg/mL、0.50μg/mL、0.75μg/mL。现用现配。

4.15 硅酸镁固相萃取小柱:500mg/6mL。

5 仪器

5.1 实验室用样品粉碎机。

5.2 分析天平:感量0.1mg。

5.3 带盖塑料离心管:100mL。

5.4 漩涡混合器。

5.5 离心机。

5.6 旋转蒸发仪:配备150mL鸡心瓶。

5.7 氮吹仪。

5.8 固相萃取装置。

5.9 超声波清洗器。

5.10 液相色谱-串联质谱仪:配备电喷雾离子源。

6 采样

6.1 采样步骤:按GB/T 14699.1 的规定执行。

6.2 试样的制备:按GB/T 20195 的规定制备试样,全部通过0.45mm孔径的筛,混匀,装入密闭容器中避光保存备用。

7 分析步骤

7.1 提取

称取约5g试样(精确到0.1mg)于离心管(5.3)中,加入2g氯化钠(4.6),加入20mL三级水,用碳酸钠饱和溶液(4.8)调pH至9~10。加人30ml。乙酸乙酯(4.7),加盖密封,漩涡(5.4)混匀1min,置离心机(5.6)4 360g离心5min,吸取上消液于150mL鸡心瓶(5.6)中。再加入30mL乙酸乙酯,重复上述操作,合并2次提取液。

7.2 净化

将提取液在60℃的旋转蒸发仪上蒸至近干,用5nL正己烷溶解残渣,加载到已用5mL正乙烷活化的硅酸镁固相萃取小柱(4.15),液体的过柱速度不要超过lmL/min;用3mL正己烷清洗鸡心瓶,清洗液也加载到硅酸镁固相萃取小柱中;用5mL洗脱液Ⅰ(4.10)洗脱,收集洗脱液于10mL具塞试管中,在40℃水浴中用氮气(5.7)吹干;再准确移取3.00mL洗脱液∏洗脱,加压吹干硅酸镁固相萃取小柱,收集洗脱液于同一具塞试管中,溶解残渣,漩涡混匀,过0.20μm有机滤膜,上机测定。如果上机溶液中各药物的浓度不在工作溶液范围内,用洗脱液Ⅱ进行调整。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱测定参数的设定

色谱柱:C18柱,柱长100mm,内径3.0mm,粒度1.8μm或性能类似的分析柱。

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