硫代葡萄糖苷( 简称硫苷) 是广泛存在于十字花科植物中的含硫次级代谢产物，主要分布于植物的根、茎和叶中。当植物细胞受到破坏( 如挤压、虫咬等) 后，硫苷与植物内生的黑芥子酶接触，降解产生异硫氰酸酯、恶唑烷酮和硫氰酸酯等化合物[1]，其中异硫氰酸酯具有良好的生物活性，而且对人畜无害。因此硫苷及其降解产物的研究引起了科学工作者的浓厚兴趣。根据侧链R 基团的不同，目前已发现约120 种硫苷，其中有多种具有抗癌、抗肿瘤、杀菌和杀虫活性的异硫氰酸酯，如吴华等[2]比较几种异硫氰酸酯的杀线虫活性，发现烯丙基和丙烯酰基异硫氰酸酯具有良好的杀线虫活性。大量研究表明甲硫基己基异硫氰酸酯等具有良好的抗肿瘤活性，是非常具有潜力的抗癌药物[3–6]。硫苷的检测方法主要是传统的化学方法和现代的仪器分析手段。化学方法耗时、误差大、操作繁琐，只能测定硫苷总量。液相色谱法具有很高的分离效率，但对于硫苷单体鉴别需要对照品，无法满足快速鉴别硫苷的需要。笔者采用超高效液相色谱–离子阱– 飞行时间质谱联用技术，既能高效分离硫苷，又能准确、快速鉴别硫苷。对于硫苷及降解产物的研究具有重要意义，同时又能够提高工作效率。
1实验部分
1.1主要仪器与试剂
超高效液相色谱– 离子阱– 飞行时间质谱仪：LCMS–IT–TOF 型，日本岛津公司;数显恒温水浴锅：HH–6 型，常州澳华仪器有限公司;真空干燥箱：VD23 型，德国BINDER 公司;电子天平：AUY220 型，日本岛津公司;超声波清洗器：KS–120EI 型，宁波海曙科生超声设备有限公司;旋转蒸发仪：R–216 型，瑞士BUCHI 公司;台式高速离心机：H–1650 型，长沙湘仪离心机仪器有限公司;研磨机：A11 基本型，德国IKA 公司;白芥种子：产地为湖北武汉;正己烷、氯仿、乙酸铵、甲酸：分析纯，广州化学试剂厂;甲醇：色谱纯，美国Fisher 公司;实验用水为美国Pall 公司Purelab Ultra 超纯水系统制备的超纯水，电阻率为18.2 MΩ · cm。
1.2硫代葡萄糖苷提取[7–8]
白芥种子在105℃干燥3 h，以灭活黑芥子酶保护硫苷。干燥种子经粉碎后，过420 μm 筛。称取粗粉约50 g 于锥形瓶中，依次用正己烷50 mL，氯仿50 mL 各3 次除脂。残渣经真空干燥，用300 mL沸腾的70% 甲醇水溶液浸泡，超声提取30 min，连续2 次，合并提取液，静置至室温。提取液经离心分离，将清液真空下浓缩至原体积的20%。取1 mL浓缩液经石墨化碳脱色，滤液供超高效液相色谱–串联质谱分析。
1.3流动相配制
用电子天平准确称量乙酸铵0.385 g，置于1 L量瓶中，加入1 mL 甲酸，用水溶解定容后，经0.22μm 微膜过滤，超声波脱气后使用。
1.4液质联用分析条件
(1)UPLC 条件
ODS C18 柱(100 mm×2.1 mm，3.5 μm，日本岛津公司) ;柱温：30℃;流动相A ：5 mmol/L 乙酸铵–1‰甲酸溶液;流动相B ：甲醇;流动相流速：0.2 mL/min ;进样体积：20 μL ;梯度洗脱：0～3min，98% A ;3～25 min，98%～20% A ;25～30 min，20%～20 % A ;30～35 min，20%～98% A。
(2)MS 条件
ESI 负离子模式;电压：–3.5 kV ;雾化气：N2，流量为1.5 L/min ;干燥气压力：100 kPa ;碰撞气：Ar ;检测器电压：1.7 kV ;Heat Block 温度：200℃;CDL 温度：200℃;一级质谱扫描范围：m/z300～700 ;母离子扫描范围：m/z 315～650 ;二级质谱扫描范围：m/z 50～700 ;离子累积时间：10 ms ;CID 碰撞能量：**** ;碰撞气能量：****。
2结果与讨论
2.1分析条件选择
硫苷在水溶液中是亲水性阴离子化合物，在反相色谱柱中，保留时间短。优化实验发现，在ODS–C18 柱上采用流动相A(5 mmol/L 的乙酸铵+0.1%甲酸) 和流动相B( 甲醇) 能够很好分离，并且有很好的质谱响应。质谱Heat Block 和CDL 温度采用200℃，温度过高会造成硫苷裂解，过低则影响离子化和脱溶剂化效果。为获得比较丰富的二级离子碎片信息，CID 碰撞能量和碰撞气能量均采用****。
2.2分析结果
按照1.4 分析条件检测白芥种子提取液，获取硫苷提取离子流色谱图及其一、二级质谱图( 见图1～图11)。根据裂解机理，并参考文献[9–12]，共鉴定出5 种硫苷，结果见表1。
2.3质谱碎片离子裂解机理
二级质谱特征离子，对于鉴别硫苷具有重要意义。在MS2 中，母离子先后失去SO3(80 Da) 和C6H10O5(162 Da) 后产生242 Da 中性分子丢失，氢重排后出现相对应的R—C(SH)=N—O— 离子。另一裂解途径是硫苷上的氢发生重排后，失去C6H11O5(163 Da) 和C6H12O5S(196 Da) 中性碎片。与此同时，二级质谱中还能观察到m/z 195，241，259，275，291 的特征离子，这些离子是由于硫与相邻碳原子发生断裂，并伴有氢重排形成的。硫代葡萄糖苷负离子模式下主要特征二级碎片离子裂解机理见图12[13–14]。
