橘红丸(大蜜丸)主要由化橘红、陈皮、半夏(制)、茯苓、甘草等15味药组成，具有清肺，化痰，止咳之功效，临床主要用于痰热咳嗽，痰多，色黄黏稠，胸闷口干等。橘红丸(大蜜丸)中炼蜜作为黏合剂约占总量的50%，因此蜂蜜的质量对该药物疗效有重要作用。蜂蜜的基本组成是以葡萄糖和果糖为主的各种糖类，其中果糖和葡萄糖含量一般占蜂蜜的60%以上，另外还含有微量元素、酶类等成分。现在市场上蜂蜜存在掺伪现象，主要替代品有转化糖浆、麦芽糖浆、果葡糖浆等[1，2]。蜂蜜中还原糖含量检测方法主要有高效液相示差法、高效液相荧光法、化学法等。为更好监测蜂蜜在橘红丸中的使用情况，笔者建立了HPLC–ELSD法测定果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量测定方法，该法灵敏度高、检出限低，提取分离简单，能更好地控制橘红丸(大蜜丸)的质量。
1. 实验部分
1.1主要仪器与试剂
高效液相色谱仪：Agillent1200型，配ELSD检测器，美国Agillent科技公司;
果糖(100057–200601)、葡萄糖(110833–200503)、蔗糖(111507–200001)、麦芽糖(100287–200701)对照品：中国食品药品检定研究院;乙腈、乙醇：色谱纯;橘红丸、蜂蜜样品：来源于2011年度全国评价性抽验橘红丸系列品种中的大蜜丸及各生产厂家提供的蜂蜜原料;实验用水为纯化水。
1.2色谱条件
色谱柱：prevailcarbohydrateES色谱柱;流动相：乙腈–水(体积比77∶23);检测器：蒸发光散射检测器(ELSD);漂移管温度：70℃;柱温：室温;进样量：5μL。理论板数按果糖色谱峰计算，不低于5000。在上述条件下，对照品溶液及供试品溶液色谱图分别见图1～图4。
1.3溶液制备
1.3.1橘红丸供试品溶液
称取橘红丸(大蜜丸)样品6g，精密称定，精密加水60mL，溶散，超声处理30min使其溶解，过滤，取续滤液1mL，置于10mL量瓶中，加水至标线，过滤。
1.3.2蜂蜜供试品溶液
称取蜂蜜1g，精密称定，置于10mL量容瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.5mL，置于10mL量瓶中，加水稀释至标线。
1.3.3空白阴性溶液
按照处方比例，计算相当于6g橘红丸(大蜜丸)所含药材的量，分别取对照药材化橘红0.33g，陈皮、茯苓、苦杏仁、瓜蒌皮、浙贝母、地黄、麦冬、石膏各0.22g，半夏(制)、炒紫苏子、紫菀各0.167g，甘草、款冬花各0.11g混合均匀，按药粉与炼蜜以1∶1的比例计算，取混合药粉1.5g，精密加水30mL，超声处理30min，过滤，取续滤液1mL，置
于10mL量瓶中，加水稀释至标线，过滤，作为空白阴性对照溶液。
2. 结果与讨论
2.1提取溶剂的选择
试验比较了30%，50%，70%乙醇及水作为供试品提取溶剂，结果表明以水为溶剂对4种糖提取效果*好，因此选择水为*终提取溶剂。
2.2工作曲线及检出限
精密称取对照品果糖10.36mg，D-无水葡萄糖10.73mg、蔗糖10.78mg、麦芽糖11.17mg，置于10mL量瓶中，加水溶解并稀释至标线，摇匀。分别进样1，2，3，5，10，12，15μL进行测定。以待测组分色谱峰面积的自然对数值为纵坐标，以进样浓度为横坐标进行线性回归(n=7)，果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的线性回归方程见表1。精密量取对照品混合溶液1mL，置于100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，进行测定。设色谱仪*低响应值为S=3N(N为仪器噪音水平)，检出限按D=S/b(b为标准曲线方程斜率)计算，结果见表1。
2.3仪器精密度试验
精密配制果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的浓度为2.3695，2.5602，0.2724，0.6027mg/mL的混合对照品溶液，平行测定5次，结果见表2。结果表明，仪器精密度较好。
2.4重复性试验
称取橘红丸(大蜜丸)样品6g，精密称定，按“1.3.1”供试品溶液的制备方法分别制得6份供试品溶液，在选择的色谱条件下测定，结果见表3。由表3结果可知，被测样品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量5次测定结果的相对标准偏差为0.28%～0.58%，说明重复性较好。
2.5加标回收试验
称取已测知含量的橘红丸约3g，精密称定后置
于锥形瓶中，精密量取对照品溶液10mL(果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的浓度分别为23.695，25.602，2.723，6.027mg/mL)，然后精密加水50mL，溶散，超声处理30min使其溶解，过滤，取续滤液1mL，置于10mL量瓶中，加水至标线，过滤，按色谱条件测定，结果见表4。
2.6空白阴性试验
取1.3.3中空白阴性供试品溶液，在选择的色谱条件下进行测定，果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量分别为15.6，11.5，5.8，0mg/g，说明在橘红丸处方中除蜂蜜以外其它药味中含有一定量的果糖、蔗糖和麦芽糖，但含量较低。
2.7样品测定
采用本方法，对114批橘红丸(大蜜丸)、21批蜂蜜样品进行了测定，测定结果分别见表5、表6。国家蜂蜜标准(GB14963–2011)规定，蜂蜜中果糖和葡萄糖含量(总量)不低于60%;蔗糖不得高于10%或5%。4种糖的测定结果表明，114批橘红丸(大蜜丸)中果糖和葡萄糖的含量(总量)、蔗糖及麦芽糖的含量差别明显，考虑到炼蜜过程可能会
导致果糖含量降低的因素[3]，果糖和葡萄糖总量大于250mg/g的样品可认为是正常样品。114批橘红丸样品中果糖和葡萄糖总量低于此限值的共有50批，占43.9%;蔗糖含量测定基本正常;麦芽糖含量范围为0～25%，说明个别批次样品疑为掺假或使用麦芽糖浆。21批蜂蜜供试品中，葡萄糖与果糖总量均高于60%，蔗糖、麦芽糖含量检测均未见异常，说明蜂蜜质量状况较好[4]。
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