食品中氨基酸怎么检测?目前对于食品中氨基酸有对应的检测方法标准依据。今天百检网就给大家介绍一下食品中氨基酸的测定方法相关信息。
检测方法标准依据：GB 5009.124-2016 食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定
1 范围
本标准规定了用氨基酸分析仪(茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪)测定食品中氨基酸的方法。
本标准适用于食品中酸水解氨基酸的测定,包括天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸共16种氨基酸
2 原理
食品中的蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸,经离子交换柱分离后,与茚三酮溶液产生颜色反应,再通过可见光分光光度检测器测定氨基酸含量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682中规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 盐酸(HCl):浓度≥36%,优级纯
3.1.2 苯酚(C6HOH)
3.1.3 氮气:纯度99.9%。
3.1.4 柠檬酸钠(Na3C6H:O;·2H2O):优级纯。
3.1.5 氢氧化钠(NaOH):优级纯。
3.2 试剂配制
3.2.1 盐酸溶液(6mol/L):取500mL盐酸加水稀释至1000mL,混匀。
3.2.2 冷冻剂:市售食盐与冰块按质量1:3混合
3.2.3 氢氧化钠溶液(500g/L):称取50g氢氧化钠,溶于50mL水中,冷却至室温后,用水稀释至100mL,混匀。
3.2.4 柠檬酸钠缓冲溶液[c(Naˉ)=0.2mo/L]:称取19.6g柠檬酸钠加入500m水溶解,加入16.5mL盐酸,用水稀释至1000mL,混匀,用6mol/L盐酸溶液或500g/L氢氧化钠溶液调节pH至2.2
3.2.5 不同pH和离子强度的洗脱用缓冲溶液:参照仪器说明书配制或购买
3.2.6 茚三酮溶液:参照仪器说明书配制或购买。
3.3 标准品
3.3.1 混合氨基酸标准溶液:经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液。
3.3.2 16种单个氨基酸标准品:固体,纯度≥98%。
3.4 标准溶液配制
34.1 混合氨基酸标准储备液(1μmol/mL):分别准确称取单个氨基酸标准品(精确至0.000011g)于同一5omL烧杯中,用8.3mL6mol/L盐酸溶液溶解,精确转移至250mL容量瓶中,用水稀释定容至刻度,混匀(各氨基酸标准品称量质量参考值见表1)。
3.4.2 混合氨基酸标准工作液(l00nmol/mL):准确吸取混合氨基酸标准储备液1.0mL于10mL容量瓶中,加pH2.2柠檬酸钠缓冲溶液定容至刻度,混匀,为标准上机液。
4 仪器和设备
4.1 实验室用组织粉碎机或研磨机。
4.2 匀浆机
4.3 分析天平:感量分别为0.0001g和0.0001g。
4.4 水解管:耐压螺盖玻璃试管或安瓿瓶,体积为20mL~30mL。
4.5 真空泵:排气量≥40L/min。
4.6 酒精喷灯。
4.7 电热鼓风恒温箱或水解炉。
4.8 试管浓缩仪或平行蒸发仪(附带配套15mL~25mL试管)
4.9 氨基酸分析仪:茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪。
5 分析步骤
5.1 试样制备
固体或半固体试样使用组织粉碎机或硏磨机粉碎,液体试样用匀浆机打成匀浆密封冷冻保存,分析用时将其解冻后使用
5.2 试样称量
均匀性好的样品,如奶粉等,准确称取一定量试样(精确至0.0001g),使试样中蛋白质含量在10mg~20mg范围内。对于蛋白质含量未知的样品,可先测定样品中蛋白质含量。将称量好的样品置于水解管中很难获得高均匀性的试样,如鲜肉等,为减少误差可适当增大称样量,测定前再做稀释。
对于蛋白质含量低的样品,如蔬菜、水果、饮料和淀粉类食品等,固体或半固体试样称样量不大于2g,液体试样称样量不大于5g。
5.3 试样水解
根据试样的蛋白质含量,在水解管内加10mL~15mL6mol/L盐酸溶液。对于含水量高、蛋白质含量低的试样,如饮料、水果、蔬菜等,可先加入约相同体积的盐酸混匀后,再用6mol/L盐酸溶液补充至大约10mL。继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。
将水解管放入冷冻剂中,冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖。
将已封口的水解管放在110℃±1℃的电热鼓风恒温箱或水解炉内,水解22h后,取出,冷却至室温。
打开水解管,将水解液过滤至50mL容量瓶内,用少量水多次冲洗水解管,水洗液移入同一50mL容量瓶内,*后用水定容至刻度,振荡混匀。
准确吸取1.0mL滤液移人到15mL或25mL试管内,用试管浓缩仪或平行蒸发仪在40℃~50℃加热环境下减压干燥,干燥后残留物用1mL~2mL水溶解,再减压干燥,*后蒸干用1.0mL~2.0mL pH2.2柠檬酸钠缓冲溶液加入到干燥后试管内溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22m滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用。
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