HJ 1216-2021 水质浮游植物的测定 0.1 ml 计数框-显微镜计数法

1 适用范围

本标准规定了测定水中浮游植物的 0.1 ml 计数框-显微镜计数法。本标准适用于地表水中浮游植物的密度测定。

样品浓缩 50 倍时，对角线方式计数方法检出限为 9.2×103cells/L；行格方式计数方法检出限为3.0×103 cells/L；全片方式计数方法检出限为 9.2×102 cells/L；随机视野方式计数的方法检出限与观察的视野数、显微镜视野面积有关，按附录A 计算。

2 规范性引用文件

本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是未注日期的引用文件，其新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB/T 14581 水质湖泊和水库采样技术指导

HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范

HJ 494 水质采样技术指导

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

浮游植物 phytoplankton

在水中营浮游生活的微小藻类植物，通常浮游植物就是浮游藻类，包括原核的蓝藻和其它各类真核藻类。

3.2

显微镜计数视野 microscope counting field

显微镜视野中限定一定面积的区域，用于定量计数浮游植物。

3.3

检出限 detection limit

单次计数过程中，发现的概率不低于 99%时低的浮游植物密度。

4 方法原理

在显微镜下，利用 0.1 ml 计数框对样品中的浮游植物进行人工分类和计数，计算单位体积样品中各种类浮游植物的细胞数量。

5 试剂和材料

除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。

5.1 碘（I2）。

5.2 碘化钾（KI）。

5.3 甲醛溶液：w＝37%～40%。

5.4 丙三醇（HOCH2CHOHCH2OH）。

5.5 鲁哥氏碘液：

称取 60 g 碘化钾（5.2），溶于 100 ml 水中，再加入 40 g 碘（5.1），充分搅拌使其完全溶解，加水定容至 1000 ml，转移至棕色磨口玻璃瓶，室温避光保存。

6 仪器和设备

6.1 25 号浮游生物网：网孔直径为 0.064 mm，网呈圆锥形，网口套在铜环上，网底端有出水开关活塞。

6.2 定性采样瓶：30 ml～100 ml 广口聚乙烯瓶。

6.3 采水器：不锈钢或有机玻璃材质，圆柱形。容量和深度规格要满足采样要求。

6.4 定量采样瓶：1 L～2 L 广口聚乙烯瓶。

6.5 正置或倒置生物显微镜：物镜 4×、10×、20×、40×，目镜 10×或 15×。

6.6 浓缩装置：1 L～2 L 筒形分液漏斗或量筒。

6.7 样品瓶：50 ml 具塞棕色玻璃广口瓶。

6.8 超声波发生装置：工作频率 40 kHz，水浴方式。

6.9 微量移液器：100 μl。

6.10 0.1 ml 浮游植物计数框：面积 20 mm×20 mm，框内划分横竖各 10 行格，共 100 个小方格。

6.11 盖玻片：面积 22 mm×22 mm，厚度小于 0.2 mm。

6.12 载物台测微计：又称镜台测微计，1 mm/100 DIV，分划值为 0.01 mm。

注：DIV 指等分格，1 mm/100 DIV 即 1 mm 等分成 100 格。

6.13 目镜分划板：又称目镜测微尺，5 mm/50 DIV，分划值为 0.1 mm。

6.14 计数器。

6.15 一般实验室常用仪器和设备。

7 样品

7.1 样品的采集

7.1.1 定性样品

点位布设及采样频次按照GB/T 14581、HJ/T 91 和HJ 494 的相关规定执行。也可根据调查研究目的确定。

使用 25 号浮游生物网（6.1）采集定性样品。关闭浮游生物网底端出水活塞开关，在水面表层至 0.5 m 深处以 20 cm/s～30 cm/s 的速度做“∞”形往复，缓慢拖动约 1 min～3 min，待网中明显有浮游植物进入，将浮游生物网（6.1）提出水面，网内水自然通过网孔滤出，待底部还剩少许水样（5 ml～10 ml）时，将底端出口移入定性采样瓶（6.2）中，打开底端活塞开关收集定性样品。采集分层样品时，用 25 号浮游生物网（6.1）过滤特定水层样品，其他步骤同采集表层样品。定性样品采集完成后及时将浮游生物网清洗干净。样品采集后冷藏避光运输。

如有定性样品采集的技术规范，按技术规范有关要求执行。

7.1.2 定量样品

按照GB/T 14581、HJ/T 91 和HJ 494 的相关规定进行定量样品的采集。

用采水器（6.3）采集样品至定量采样瓶（6.4）中，一般采集不少于 500 ml 样品。若水体透明度较高，浮游植物数量较少时，应酌情增加采样体积。定量样品采集后，样品瓶不应装满，以便摇匀。

注 1：有些浮游植物（如蓝藻）常浮于水面或成片、条带分布，可在此水华密集区域采样作为峰值参考。注 2：定量样品采集应在定性样品采集之前。应保持固定时间段采样，以便结果之间可相互比较。

7.2 样品的保存

7.2.1 定性样品

定性样品采集后立即加入鲁哥氏碘液（5.5），用量为水样体积的 1.0%～1.5%。镜检活体样品不加鲁哥氏碘液固定。定性样品在室温避光条件下可保存 3 周；1 ℃～5 ℃冷藏避光条件下可保存 12 个月。活体样品在 4 ℃～10 ℃避光条件下可保存 36 h。

7.2.2 定量样品

定量样品采集后立即加入鲁哥氏碘液（5.5）固定，用量为水样体积的 1.0%～1.5%。也可将鲁哥氏碘液（5.5）提前加入定量采样瓶（6.4）中带至现场使用。定量样品在室温避光条件下可保存 3 周；1 ℃～ 5 ℃冷藏避光条件下可保存 12 个月。

样品在保存过程中，应每周检查鲁哥氏碘液（5.5）的氧化程度，若样品颜色变浅，应向样品中补加适量的鲁哥氏碘液（5.5），直到样品的颜色恢复为黄褐色。

注：若样品需长期保存，应加入甲醛溶液（5.3），用量为水样体积的 4%。