细胞毒性检测

什么是体外细胞毒性试验？

体外细胞毒性试验是一种在离体状态下模拟生物体生长环境，检测医疗器械及生物材料接触机体组织后所发生的细胞溶解、抑制细胞生长和其他毒性作用的体外试验。体外细胞毒性试验是医疗器械生物学评价体系中*重要的检测指标之一，几乎也是医疗器械及生物材料临床应用前的必选项目

体外细胞毒性试验依据的相关标准

ISO 10993-5:2009 Biological Evaluation of Medical Devices -Part 5: Tests for in vitro Cytotoxicity

GB/T16886.5-2007医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验，GB/T16886是由ISO 10993转化过来的标准

GB/T 16175-2008  医用有机硅材料生物学评价试验方法

GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分：生物试验方法

YY/T0127.9-2009口腔医疗器械生物学评价 第2单元 试验方法 细胞毒性试验：琼脂扩散法及滤膜扩散法 

体外细胞毒性试验的目的和意义

目的：评级医疗器械和生物材料致细胞毒性反应的潜在性，并预测*终生物体应用时的组织细胞反应。通过体外细胞培养技术，可检测供试品接触细胞后细胞发生生长抑制、功能改变、细胞溶解、死亡或其他毒性反应。

意义：可在短时间内较经济、简便地筛选出批量供试品的细胞毒性，它为动物试验的进行与否提供了先决条件，对新型医疗器械及生物材料的研制和应用提供了重要保证。 

体外细胞毒性试验方法

体外细胞毒性试验具有通用性，可以适用于各种医疗器械和生物材料的评价，GB/T16886.5标准不是规定一个单一的试验方法，而是规定一个试验方案，需要在一系列试验步骤中判断，以选出*合适的试验，试验主要分三类：浸提液试验，直接接触试验和间接接触试验（琼脂扩散试验和滤膜扩散试验）。

由于医疗器械产品和材料的多样性，植入机体环境中的变异性，与机体相互作用的复杂性等因素，选择哪种方法进行体外细胞毒性评价，不同的试验人员会有不同的选择。当一个评价项目具有多个试验方法时，应考虑试验的原理、灵敏性、可选性、可定量性、重现性、试验材料的适用性及局限性等因素进行选择。例如浸提液法适合检测溶出物的毒性；直接接触法对材料的细胞毒性敏感性*高，可检测出材料微弱的细胞毒性，间接接触法中的琼脂扩散试验适合于毒性大的大批量材料筛选，滤膜扩散法适合于小分子量毒性材料的评价。以上各种方法因原理不同，各有特点，应根据试验材料本身理化性质、毒性作用强弱及其用途，正确地选择试验方法。

浸提液试验-MTT法，XTT法和WST-8法比较

MTT（二苯基四氮唑）法，又称MTT比色法，检测原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法有灵敏度高、较经济的优点。

XTT（二甲氧唑黄）是类似MTT的化合物，XTT法检测原理与MTT法相同。在电子耦合试剂存在的情况下，活细胞线粒体中存在与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶，可将黄色的XTT还原成水溶性的橘黄色的甲瓒，生成的甲瓒能够溶解在组织培养基中，不形成颗粒，可直接用酶标仪测定吸光值。

 

WST-8（四唑单钠盐）属于MTT的升级产品，检测原理是在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲瓒产物。产物颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。该方法简便、准确、灵敏度高，但是价格比MTT法略高。

医疗器械测试周期：

2周，具体视产品而定，可询问我司医疗工程师；

体外细胞毒性检测送样要求：

ISO 10993标准： 固体或粉末状： 2个完整样品，每个样品需120 cm2 或 4 g及以上； 液体或化学品：10ml及以上

ISO 7405标准：   固体或粉末状： 2个完整样品，每个样品需120 cm2 或 4 g及以上； 液体或化学品：10ml及以上

GB 16886/ 14233标准：  固体或粉末状： 2个完整样品，每个样品需120 cm2 或 4 g及以上； 液体或化学品：10ml及以上

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