性激素测试
百检网 2021-12-06
1 范围本规范规定了测定化妆品中雌三醇等7 种性激素的高效液相色谱-二*管阵列检测器法、高效液相色谱-紫外检测器/荧光检测器法和气相色谱/质谱鉴定法。本规范适用于化妆品中雌三醇等7 种性激素的检测和鉴定。**法 高效液相色谱-二*管阵列检测器法2 方法提要以有机溶剂提取化妆品中的性激素，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱图或荧光光谱图定性，以峰面积进行定量。各激素的检出限及取1g 样品时的检出浓度见表1。表1 各激素的检出限和检出浓度激素组分 雌三醇 雌酮 己烯雌酚雌二醇睾丸酮甲基睾丸酮 黄体酮检出限，μg 0.02 0.04 0.01 0.02 0.002 0.002 0.003检出浓度，μg/g 40 80 20 40 4 4 63 试剂本标准所用试剂除另有说明外，均为优级纯试剂。3.1 甲醇。3.2 饱和氯化钠溶液。3.3 环己烷。3.4 硫酸 [ϕ（H2SO4）＝2％]：取硫酸（ρ20＝1.84g/mL）2mL，缓慢加入到98mL 水中，混匀。3.5 激素标准溶液3.5.1 雌激素标准溶液[ρ（雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚）＝2g/L]：分别称取雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.200g，用少量甲醇（3.1）溶解，移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。3.5.2 雄激素标准溶液[ρ（睾丸酮、甲基睾丸酮）＝600mg/L]：分别称取睾丸酮、甲基睾丸酮各0.600g，用少量甲醇（3.1）溶解，转移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。1mL此溶液含以上两种雄激素6.00mg。移取此标准溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀释到刻度。3.5.3 孕激素标准溶液[ρ（黄体酮）＝600mg/L]：称取黄体酮0.600g，用少量甲醇（3.1）溶解，转移至100mL 容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。1mL 此溶液含孕激素6.00mg。移取此标准溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀释到刻度。2213.5.4 混合标准使用溶液：分别移取雌激素标准溶液（3.5.1）50.0mL，雄激素标准溶液（3.5.2）5.00mL 和孕激素标准溶液（3.5.3）5.00mL 置于100mL 容量瓶中，用甲醇（3.1）稀释到刻度。1mL 此溶液分别含4 种雌激素各1.00mg、2 种雄激素各30.0μg 和1 种孕激素30.0μg。4 仪器4.1 高效液相色谱仪，具等容泵、二*管阵列检测器或荧光检测器。4.2 离心机。4.3 具塞比色管，10mL。5 分析步骤5.1 样品预处理5.1.1 溶液状样品：准确称取样品1g～2g 于10mL 具塞比色管中，在水浴上馏除乙醇等挥发性有机溶剂，用甲醇（3.1）稀释到10mL，备用。5.1.2 膏状、乳状样品：准确称取样品1g～2g 于100mL 锥形瓶中，加入饱和氯化钠溶液（3.2）50mL，硫酸（3.4）2mL，振荡溶解后转移至100mL 分液漏斗。以环己烷（3.3）30mL 分三次萃取，必要时离心分离。合并环己烷并在水浴上馏除。用甲醇（3.1）溶解残留物，转移到10mL 具塞比色管中，用甲醇稀释到刻度。混匀后，经0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。5.2 色谱参考条件色谱柱：C18 柱，250×4.6mm，10μm；检测波长：二*管阵列检测器（雌性激素－204nm，雄性激素－245nm）或荧光检测器（激发波长280nm，发射波长310nm）；流动相：甲醇+水=60+40；流速：1.3mL/min；5.3 校准曲线的制备移取激素标准使用溶液（3.5.4）0.00、1.00、2.00、5.00mL 置于10mL 具塞比色管中，用甲醇（3.1）稀释到刻度。调节仪器到*佳状态，取样5μL 注入高效液相色谱仪，以标准品的峰面积绘制校准曲线。5.4 测定取待测溶液5μL 注入高效液相色谱仪，根据峰的保留时间和紫外吸收光谱图或荧光光谱图定性，根据峰面积从曲线上查出待测溶液中激素的质量浓度。6 计算ρ×Vω（激素）=m式中：ω（激素）——样品中激素的质量分数，μg/g；ρ——从曲线上查出测试溶液中激素的质量浓度，mg/L；V——样品定容体积，mL；m——样品取样量，g。2227 色谱图第二法 高效液相色谱-紫外检测器法/荧光检测器法8 方