GB 4789.9-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌检验 检测标准

百检检测第三方检测业务范围广泛，同时已开展多年的业务检测范围，全国近千家实验室，资质齐全，相关检测标准如下：

1.范围

本标准规定了食品中空肠弯曲菌( Campylobacter jejuni)的检验方法。

本标准适用于食品中空肠弯曲菌的检验。

2.设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:

a) 恒温培养箱:25℃±1℃、36℃±1℃、42℃±1℃；

b) 冰箱:2℃～5℃

c) 恒温振荡培养箱:36℃±1℃、42℃±1℃;

d) 天平:感量0.1g；

e) 均质器与配套均质袋；

f) 振荡器;

g) 无菌吸管:1mL(具001m刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头；

h) 无菌锥形瓶:容量100mL、200mL、2000mL;

i) 无菌培养皿:直径90mm;

j) pH计或pH比色管或精密pH试纸；

k) 水浴装置:36℃±1℃、100℃;

l) 微需氧培养装置:提供微需氧条件(5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气);

m) 过滤装置及滤膜(0.22μm、0.45μm);

n) 显微镜:10倍~10倍,有相差功能;

o) 离心机:离心速度≥20000g;

p) 比浊仪;

q) 微生物生化鉴定系统。

3.培养基和试剂

3.1 Bolton肉汤( Bolton broth):见附录A中A.1。

3.2 改良CCD琼脂( modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar, cCDA):见附录A中A2。

3.3 哥伦比亚血琼脂( Columbia blood agar):见附录A中A3。

3.4 布氏肉汤( Brucella broth):见附录A中A4。

3.5 氧化酶试剂:见附录A中A.5。

3.6 马尿酸钠水解试剂:见附录A中A.6

3.7 Skirrow血琼脂( Skirrow blood agar):见附录A中A.7。

3.8 吲哚乙酸酯纸片:见附录A中A.8。

3.9 0.1%蛋白胨水:见附录A中A9。

3.10 lmol/L硫代硫酸钠(Na2S2O3)溶液:见附录A中A.10。

3.11 3%过氧化氢(H2O2)溶液:见附录A中A.11。

3.12 空肠弯曲菌显色培养基。

3.13 生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。

4.检验程序

空肠弯曲菌检验程序见图1。

5.操作步骤

5.1 样品处理

5.1.1 一般样品

取25g(mL)样品(水果、蔬菜、水产品为50g)加入盛有225 mL Bolton肉汤的有滤网的均质袋中(若为无滤网均质袋可使用无菌纱布过滤),用拍击式均质器均质1min~2min,经滤网或无菌纱布过滤,将滤过液进行培养。

5.1.2 整禽等样品

用200mL0.1%的蛋白胨水中充分冲洗样品的内外部,并振荡2min～3min,经无菌纱布过滤至250mL离心管中,16000g离心15min后弃去上清,用10mL0.1%蛋白胨水悬浮沉淀,吸取3mL于100mLBolton肉汤中进行培养。

5.1.3 贝类

取至少12个带壳样品,除去外壳后将所有内容物放到均质袋中,用拍击式均质器均质1min～2min,取25g样品至225mL Bolton肉汤中(1:10稀释),充分震荡后再转移25mL于225mL Bolton肉汤中(1:100稀释),将1:10和1:100稀释的 Bolton肉汤同时进行培养。

5.1.4 蛋黄液或蛋浆

取25g(mL)样品于125mL Bolton肉汤中并混匀(16稀释),再转移25mL于100mL Bolton肉汤中并混匀(1:30稀释),同时将1:6和1:30稀释的 Bolton肉汤进行培养。

5.1.5 鲜乳、冰淇淋、奶酪等

若为液体乳制品取50g;若为固体乳制品取50g加入盛有50mL0.1%蛋白胨水的有滤网均质袋中,用拍击式均质器均质15s~30s,保留过滤液。必要时调整pH值至7.5±0.2,将液体乳制品或滤过液以20000g离心30min后弃去上清,用l0mL Bolton肉汤悬浮沉淀(尽量避免带入油层),再转移至90mLBolton肉汤进行培养。

5.1.6 需表面涂拭检测的样品

无菌棉签擦拭检测样品的表面(面积至少100cm2以上),将棉签头剪落到100mL Bolton肉汤中进行培养。

5.1.7 水样

将4L的水(对于氯处理的水,在过滤前每升水中加入5mL Imol/L硫代硫酸钠溶液)经0.45μm滤膜过滤,把滤膜浸没在100 ml Bolton肉汤中进行培养。

5.2 预增菌与增菌

在微需氧条件下,36℃±1℃培养4h,如条件允许配以100r/min的速度进行振荡。必要时测定增菌液的pH值并调整至74±0.2,42℃±1℃继续培养24h～48h。

5.3 分离

将24h增菌液、48h增菌液及对应的1:50稀释液分别划线接种于 Skirrow血琼脂与 mCCDA琼脂平板上,微需氧条件下42℃±1℃培养24h～48h。另外可选择使用空肠弯曲菌显色平板作为补充。