检测及试验方法
溶液配制
流动相：0.05 mol／L磷酸二氢钾溶液(pH 3)，准确称取磷酸二氢钾固体13.619 4 g，用水溶解后过0.45μm滤膜，用水定容至2 L，然后滴加磷酸调节pH值为3。
提取液：称取30 g偏磷酸，用水溶解并稀释至1 000 mL。
维生素C标准储备液：精确称取0.010 0 g维生素C标准品，用3%偏磷酸溶液溶解，配制成1mg／mL的标准储备液。4℃避光保存，现用现配。
样品处理
1.果汁饮料
称取试样2 g于50 mL棕色容量瓶中，用3%偏磷酸溶液定容至刻度，混匀，用0.22μm水系滤膜过滤，待测定。
2.大米、果冻、果泥、含乳饮料
称取试样5 g，加入30 mL 3%偏磷酸溶液，超声15 min且超声过程中加入冰块控制水浴温度在10～20℃之间，以4 000 r／min离心10 min。用0.22μm水系滤膜过滤后待测。
3.奶粉
称取试样2 g，加入20 mL 45～50℃水，涡旋混匀1 min，超声15 min且超声过程中需要加入冰块控制水浴温度在10～20℃之间。用5 mol／L盐酸溶液调节pH至1.90±0.5，放置2 min，再用5mol／L氢氧化钠溶液调节pH至4.70±0.5，以4 000r／min离心10 min，用0.22μm水系滤膜过滤后待测。上述样品处理骤均在避光条件下进行。
维生素C的稳定性试验
维生素C是*不稳定的水溶性维生素，对光和温度都非常敏感，碱性和中性环境中稳定性较差，且易被氧化。用不同溶剂(1%草酸、0.01 mol／L盐酸、3%偏磷酸、0.01%乙酸、水、0.1%三氟乙酸、0.1mol／L KH2PO4、10 mmol／L乙酸铵和甲醇)分别配制100μg／mL标准溶液，4℃冰箱避光储存。测试不同溶剂不同时间段维生素C的峰面积并进行比较，结果表明，维生素C在酸性环境中抗氧化能力较好，且采用3%偏磷酸溶剂配制的维生素C标准储备液在10 h内基本不分解，可用于定量分析，10 h后开始出现少量分解，到12 h时分解22%。因此用3%偏磷酸配制的储备溶液在10 h之内能够满足定量分析的要求。
维生素C提取条件优化
1.提取溶剂
大米、果泥、果冻和含乳饮料：维生素C具有较强的还原性，易受空气、光、热等因素影响，但在酸性条件下稳定。实验选取了0.1%盐酸、0.1%草酸、水、3%偏磷酸、0.01 mol／L盐酸–甲醇(20∶80)、甲醇–水–磷酸(100∶400∶0.5)、0.1%磷酸、0.01%三氯乙酸–甲醇(50∶50)、4%三氯乙酸、3%偏磷酸–乙酸(50∶50)作为提取剂做添加回收试验，结果发现，用3%偏磷酸作为提取剂回收率高且沉淀完全，且用3%偏磷酸配制的维生素C储备溶液在10 h之内能够稳定存在。因此实验选取3%偏磷酸作为提取溶剂。
奶粉：因奶粉含有蛋白质、脂肪、维生素、多糖等复杂成分使得前处理方法比其它基质有较大难度。尤其奶粉中含有大量的蛋白质及脂肪等大分子两性物质，在测定过程中容易形成泡沫、浑浊或出现沉淀而无法进行测定。实验尝试加入乙腈、乙酸锌–亚铁氰化钾、乙醇、三氯甲烷、三氯乙酸沉淀蛋白，发现回收率偏低且沉淀不完全；利用固相萃取法进行样品前处理步骤繁琐，且回收率偏低。实验发现：利用等电位法沉淀蛋白质，不仅可以使蛋白质沉淀完全且回收率高。考虑到维生素C在酸性环境中相对稳定，因此在前处理过程中既要保证蛋白质沉淀完全，又要使样品溶液pH值小于7。实验参考GB5413.14–2012，并根据维生素C的性质进行了相应调整，试验发现：当pH值为1.9±0.5和4.7±0.5时沉淀效果较好，提取液澄清，且大分子物质沉淀完全，维生素C的平均回收率在90.8%～106.5%之间，相对标准偏差在0.21%～3.72%之间。
