检测及试验方法
样品和样品前处理
血液标准物质(Seronorm™Trace Elements in Whole Blood,Level I),采用四甲基氢氧化铵(TMAN) +0.1%Triton-X稀释20倍后待测。金和银纳米粒子(金颗粒-30nm和/或60nm,NIST®8012\8013;银颗粒-40和/或60nm,TedPella™Inc.)按不同浓度加入到血样中。为了打碎结块的粒子,储备液需要超声5min后再加入到血样中。制备好的血样摇匀后测定。
结果分析
初步实验采用金纳米粒子。图1为加入30nm和60nm金NPs(每种约100,000个粒子/mL)的血样,如图所示,可以清晰的区分两种粒子的粒径分布,表明这两种大小的金纳米粒子可以被分析检测。样品连续测定3次,测定的粒子大小结果。见表1
eplicate |
Nominal Size (nm) |
Most Frequent Size (nm) |
Mean Size (nm) |
Particle Concentration (Particles/mL) |
1 |
30 |
30 |
31 |
108,710 |
60 |
61 |
62 |
107,490 |
|
2 |
30 |
31 |
31 |
102,878 |
60 |
61 |
62 |
101,294 |
|
3 |
30 |
30 |
32 |
102,017 |
60 |
60 |
62 |
103,467 |
表明方法的准确性和重复性。
接下来,将40nm和60nm的银NPs加入到血样中,使每毫升样品中总粒子浓度约为200,000个。图2显示出检测得到的粒子分布,表4为连续测定3次的分析结果。样品中40nm粒子数量比60nm粒子多,除此之外,测定结果对两种粒子均具有好的准确性和重复性。
表2.连续测定3次的分析结果
Replicate |
Nominal Size (nm) |
Most Frequent Size (nm) |
Mean Size (nm) |
Particle Concentration (Particles/mL) |
1 |
40 |
41 |
42 |
100,024 |
|
60 |
60 |
63 |
97,483 |
2 |
40 |
41 |
42 |
101,967 |
|
60 |
61 |
63 |
98,957 |
3 |
40 |
41 |
42 |
102,263 |
|
60 |
60 |
63 |
99,069 |
为考察血样中低粒子浓度也可以被检测,将40nm银NPs加入到血样中,使每毫升样品中约含有50,000个粒子,是前面实验浓度的一半。图3为粒子分析结果,同时,表5中数据表明,即使是低浓度的银NPs采用本文方法检测也可以得到好的准确性和重复性。
表3.连续测定3次数据结果重复性良好
Replicate |
Nominal Size (nm) |
Most Frequent Size (nm) |
Mean Size (nm) |
Particle Concentration (Particles/mL) |
1 |
40 |
42 |
43 |
50,242 |
2 |
40 |
42 |
43 |
50,775 |
3 |
40 |
42 |
42 |
50,486 |