1范围
本标准规定了食品中维生素B的测定方法。本标准**法为高效液相色谱法,第二法为荧光分光光度法,适用于各类食品中维生素B的测定。
2原理
试样在稀盐酸环境中恒温水解v调pH 至6.0~6.5,用木瓜蛋白酶和高峰淀粉酶酶解,定容过滤后,滤液经反相色谱柱分离,高效液相色谱荧光检测器检测,外标法定量。
3试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。3.1试剂
3.1.1盐酸(HCD.
3.1.2冰乙酸(CH,COOH.3.1.3氢氧化钠(NaOH)。
3.1.4三水乙酸钠(CH,COONa - 3H,O.3.1.5甲醇(CH,OH);色谱纯。
3.1.6木瓜蛋白酶;活力单位≥10 U/mg.
3.1.7高峰淀粉酶:活力单位≥100 U/mg,或性能相当者。3.2试剂配制
3.2.1―盐酸溶液(O.1 mol/L):吸取9 mL盐酸﹐用水稀释并定容至1 000 ml.3.2.2盐酸溶液(1+1);量取100 mL盐酸,缓慢倒人100 ml.水中,混匀。
3.2.3氢氧化钠溶液(1 mol/L);准确称取4g氢氧化钠,加 90 ml.水溶解,冷却后定容至100 mL。3.2.4︰乙酸钠溶液(0.1 mol/L):准确称取13.60 g三水乙酸钠,加900 ml.水溶解,用水定容至1 000 mL。
3.2.5乙酸钠溶液(0.05 mol/L):准确称取6.80 g三水乙酸钠,加 900 mL.水溶解,用冰乙酸调pH 至4.0~5.0,用水定容至1 000 mL。
3.2.6 混合酶溶液;准确称取2.345 g木瓜蛋白酶和1.175 g高峰淀粉酶,加水溶解后定容至50 mL.临用前配制。
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